论文摘要
Cyclin-dependent kinase 11（CDK11）蛋白家族,即PITSLRE蛋白激酶家族,是一类丝／苏氨酸蛋白激酶,其功能与细胞周期调控、肿瘤的发生以及细胞凋亡相关。研究发现,细胞在发生凋亡过程时,全长的CDK11p110或者CDK11p58被caspase剪切,产生一个分子量大小约46-50 kDa的蛋白,含有CDKll蛋白羧基端的激酶活性区域。进一步研究发现CDKl 1p46在细胞凋亡中发挥重要的作用,但具体机制尚不明确。我们通过His pull-down联合质谱分析发现核糖体小亚基蛋白S8（RPS8）为CDK11p46相互作用蛋白。GST pull-down和免疫共沉淀实验验证了CDK11p46和RPS8在体外与体内均存在相互作用,免疫荧光共聚焦分析也揭示了它们在细细胞核内存在共定位。体外激酶实验发现,RPS8并不是CDK11p46的底物。进一步的功能研究表明,CDK11p46和RPS8协同抑制帽依赖（cap-dependent）以及帽非依赖（IRES-dependent）的蛋白质翻译,并且协同提高了细胞对于Fas配体诱导凋亡的敏感性。我们的研究为进一步的CDK11p46在调控蛋白质翻译和细胞凋亡中的机制研究奠定了基础。近年来,蛋白质翻译调控越来越受到关注,其在细胞生长、肿瘤发生以及细胞凋亡中起着中心调节作用,但具体的作用机制尚不明确。核糖体是蛋白质合成的场所,由核糖体蛋白及rRNA组成的复合物。研究发现,核糖体蛋白以及相关翻译因子在蛋白质翻译调控中起到关键的作用。其中,这些调节蛋白的磷酸化修饰,往往调控着这些蛋白的功能。在第一部分的研究中,我们发现RPS8能够抑制帽依赖以及帽非依赖的蛋白质翻译。我们进一步利用在线软件Scansite预测了RPS8可能的磷酸化位点,并构建了一系列磷酸化位点缺失突变体和模拟磷酸化突变体。通过荧光素酶报告基因活性检测,发现RPS8的T130位点的磷酸化对蛋白质翻译有影响。通过Genedoc软件进行同源比对发现T130位点在哺乳动物以及线虫中保守,GPS2.1软件分析提示了RPS8的T130位点可能的磷酸化激酶,为进一步的RPS8在蛋白质翻译中的功能研究奠定了基础。
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相关论文文献
- [1].甘薯及2个近缘野生种ndhA,ndhB,ycf3,atpA和rps8基因RNA编辑位点的鉴定与分析[J]. 江苏师范大学学报(自然科学版) 2019(02)