幽门螺杆菌NCTC11637株Hp1501基因重组蛋白的原核表达与纯化

论文摘要

目的原核表达,并纯化幽门螺杆菌NCTC11637菌株的1501基因,为进一步研究Hp1501基因表达蛋白的功能和筛选预防H.pylori感染疫苗的候选抗原提供实验材料。方法用PCR技术从H.pylori NCTC11637菌株基因组扩增1501基因,T-A克隆后鉴定、测序;用生物信息学软件分析后,构建表达载体pQE30-Hp1501a,转化E.coli XL1-blue,IPTG诱导表达重组蛋白,经SDS-PAGE及Western blot鉴定,亲和层析法纯化重组蛋白。结果测序分析表明Hp1501基因全长为1164bp,与GeneBank公布的H.pylori国际标准株26695和J99的基因序列一致性为96%～97%,氨基酸H.pylori一致性为97%～98%;构建的表达质粒经测序鉴定,其插入H.pylori完全正确;SDS-PAGE分析表明,在37kDa处有一新生的蛋白带,表达量约占菌体总蛋白的21%;重组蛋白主要以包涵体形式存在,纯化后纯度约91%,Western blot表明重组蛋白表达成功。结论首次成功原核表达并纯化H.pylori NCTC11637菌株Hp1501基因重组蛋白,为Hp外膜蛋白生物学功能和疫苗的研究奠定了基础。

论文目录

• 英汉缩略语名词对照
• 摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 第一部分 幽门螺杆菌NCTC11637 株Hp1501 基因序列的获取
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 小结
• 第二部分 重组表达质粒的构建
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 小结
• 第三部分 重组蛋白的表达与纯化
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 小结
• 全文总结
• 参考文献
• 文献综述
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间的研究成果及发表的学术论文目录