论文摘要
背景冠状动脉粥样硬化性心脏病是一种多基因疾病,遗传因素在冠状动脉粥样斑块病变的发展及其并发症发生中也发挥着至关重要的作用,研究CAD的遗传危险因素对于开展有针对性的人群预防,延缓或防止冠心病的发生发展具有重要的理论意义。在动脉粥样硬化的形成和发展过程中,氧化和炎症扮演着重要角色。LDL中的磷脂被氧化脂质（如脂肪酸）氧化,产生的过氧化物导致轻微修饰的LDL的产生,并启动一系列步骤形成早期的脂纹。脂质过氧化物的不断形成和聚集,最终将加速动脉粥样硬化的发展。高密度脂蛋白作为脂蛋白中颗粒最小,密度最高的一种,被认为具有抗动脉粥样硬化的功能,除了是因为它具有促进胆固醇逆转运的作用外,还因为它具有抗氧化、抗炎的功能。HDL所含的几种酶类参与了它的此项功能,脂蛋白相关磷脂酶A2（Lipoprotein-associated phospholipase A2,Lp-PLA2）即是其中一种。Lp-PLA2是磷脂酶A2超家族中的一种亚型,也被称为血小板活化因子乙酰水解酶（PAF-AH）。流行病学研究揭示,Lp-PLA2与冠心病发病风险存在关联,但并不清楚该现象是对动脉粥样硬化炎症刺激的一种应答反应还是导致动脉粥样硬化的直接原因,或者是一种发病风险标识。一方面,Lp-PLA2可以水解血小板活化因子（PAF）和LDL氧化或氧化应激导致产生的氧化脂质产物,因此被认为具有抗动脉粥样硬化作用;但是另一方面,研究发现,Lp-PLA2还能水解氧化磷脂产生溶血磷脂酰胆碱（lyso-PC）和自由氧化脂肪酸,而这些物质均具有促动脉粥样硬化的作用。对Lp-PLA2基因多态性的研究发现,第9外显子V279F位点和第11外显子A379V位点的变异具有功能意义,这两个位点的变异与冠心病存在关联。关于Lp-PLA2基因多态性位点与冠心病的关系,在中国人群中尚未进行过大样本的研究。因此本研究主要关注Lp-PLA2基因V279F和A379V这两个位点在中国汉族冠心病患者和健康对照人群中的基因多态性,以及它们与冠心病的发病及严重程度之间的关系。目的1.研究中国汉族人群冠心病患者和健康对照人群中Lp-PLA2V279F和A379V多态性位点的分布特点,比较冠心病患者和健康人群之间上述两个位点基因型和基因频率的差异;2.分析在中国汉族人群中Lp-PLA2V279F和A379V两个多态性位点与冠心病患者的传统危险因素、脂类代谢情况、冠状动脉病变特点以及冠心病严重程度之间的相关性,进而揭示Lp-PLA2在冠心病发病过程中发挥的作用。方法1.收集经冠脉造影确诊或有心梗病史的冠心病患者及同期体检的健康对照。收集各研究对象的冠心病传统危险因素相关信息,包括年龄、性别、吸烟史、家族史以及既往病史（高血压、糖尿病或血脂异常等病史）;收集病情严重程度的评价指标,包括心肌梗死病史、冠脉病变严重程度、肌钙蛋白、脑钠肽等;2.经静脉采取空腹血样,使用传统酚抽提法从血细胞中提取DNA;3.Taqman探针法对Lp-PLA2第9外显子的V279F位点和第11外显子的A379V位点进行分析,对上述两个位点的基因型和等位基因在冠心病组和正常对照组的频率进行比较分析;4.对上述基因位点多态性与临床表型的相关性进行分析。结果1.研究共纳入冠心病患者806例（年龄61.51±10.74岁,男:女比例为620:186）,健康对照者482例（年龄61.63±8.41岁,男:女比例为264:218）,两组患者性别存在显著差异（p＜0.001）。对冠心病传统危险因素的比较分析发现,冠心病组BMI、高血压患病率、FBG和HsCRP水平显著高于正常对照组,而HDL-C、ApoA1显著低于正常对照组。2.Lp-PLA2V279F位点的基因型与等位基因在两组间的分布有显著差异,冠心病组VF+FF基因型和F等位基因出现频率显著高于正常对照组（两组VF+FF基因型的频率分别为13.6%和9.3%,p=0.024;F等位基因的频率分别为6.9%和4.9%,p=0.037）;而A379V位点基因型和等位基因的频率在冠心病患者和正常对照之间无显著差异。SHESIS单体型分析发现,两位点形成的单体型中TC单体型与冠心病发病相关（OR=1.449,95%CI[1.019-2.061],p=0.038）。3.对多支病变患者与正常对照组的比较发现,多支病变患者中V279F位点的VF+FF基因型和F等位基因的出现频率均显著高于正常对照组,VF+FF基因型频率为15.2%（p=0.005）;F等位基因频率为7.7%（p=0.009）;同时也显著高于单支病变亚组（对应p值分别为0.027和p=0.028）;4.对单支冠脉狭窄≥70%的冠心病患者与正常对照组的比较发现,该群患者中VF+FF基因型和F等位基因的频率也显著高于正常对照组,冠脉中重度狭窄患者VF+FF基因型频率为14.1%（p=0.013）,F等位基因频率为7.1%（p=0.025）。5.对冠心病患者中有心梗病史者和无心梗病史者的比较分析发现,心梗患者中A379V位点的V379等位基因的出现频率显著高于无心梗病史的冠心病患者（分别为18.7%和14.8%,p=0.038）,同时VV基因型的频率也显著高于无心梗病史患者（分别为3.3%和1.2%,p=0.043）。6.对冠心病合并/未合并高血压患者及冠心病合并/未合并糖尿病患者的亚组间比较均未发现V279F和A379V位点变异在上述两亚组间存在显著差异。7.冠心病发病风险分析提示V279F位点变异与冠心病发病相关（OR=1.525,95%Cl[1.056-2.202],p=0.024）,经校正性别、BMI和高血压后仍显示具有相关性（OR=1.611,95%CI[1.020,2.545],P=0.041）。在冠心病患者中进行的心梗发病风险分析提示A379V位点变异与冠心病患者心梗发生相关,经校正性别、BMI、吸烟、HsCRP、HDL-C和LDL-C后仍显示具有相关性（OR=1.596,95%CI[1.104,2.306],P=0.013）。8.比较V279F和A379V位点各基因型个体的血脂水平发现,冠心病组人群中A379V位点AV+VV基因型个体的LDL-C和ApoB水平显著高于AA基因型个体（LDL-C平均值分别为2.63mmol/l和2.48mmol/l,p=0.030,ApoB平均值分别为0.88mmol/l和0.81mmol/l,p=0.018）,但正常对照人群中未发现该差异。其余血脂指标在两组人群各基因型个体之间无显著差异。结论1.Lp-PLA2V279F位点变异与冠心病相关,冠心病患者中VF+FF基因型频率显著高于正常对照,F等位基因携带者冠心病发病风险增加,冠脉病变程度更重。2.Lp-PLA2A379V位点与冠心病发病无明显关联,但该位点变异与冠心病患者中心梗发生相关,有心梗病史的冠心病患者中VV基因型和V379等位基因的出现频率显著高于无心梗病史的冠心病患者,AV+VV基因型患者心梗风险增加。3.Lp-PLA2A379V位点的AV+VV基因型个体的LDL-C和ApoB水平显著高于AA基因型个体。4.Lp-PLA2V279F和A379V位点形成的TC单体型与冠心病发病相关。
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标签：脂蛋白相关磷脂酶论文; 血小板活化因子乙酰水解酶论文; 单核苷酸多态性论文; 关联研究论文; 单体型论文; 冠心病论文;