大鼠KCTD10基因的克隆及功能研究

论文摘要

肿瘤坏死因子α（TNF-α）是一个多功能的细胞因子,在许多细胞生理过程中起重要作用,比如细胞凋亡、细胞增殖、B细胞激活、肝细胞的再生以及一些急性的细胞炎症反应等。人类的PDIP1（polymerase delta-interacting protein 1）是一种受TNF-α和白介素6（IL-6）诱导的蛋白,并且能与增殖细胞核抗原（PCNA）和DNA聚合酶δ的小亚基有相互作用。PDIP1家族的另一个成员TNFAIP1蛋白（又称为B12基因）,能够受TNF-α诱导,并且能与PCNA、P50相互作用。在大鼠中,也证实了PDIP1和TNFAIP1基因的存在并且已被克隆。我们用大鼠的PDIP1基因在GeneBank中搜寻到了一组与PDIP1有较大的序列相似性的EST,并且通过RACE扩增出了其cDNA全长,命名为KCTD10（Potassium Channel Tetramerisation Domain-containing 10）。大鼠KCTD10与PDIP1及TNFAIP1在氨基酸序列上高度保守,在N端区域,都有一个BTB/POZ的结构域;而在C端区域,则是PCNA的结合基序（QTKV-EFP）。根据PDIP1和TNFAIP1能够与PCNA和P50相互作用,我们用免疫共沉淀等方法确定了大鼠KCTD10与PCNA以及P50之间也有相互作用。同样,因为TNF-α能够诱导PDIP1和TNFAIP1基因的表达,我们通过TNF-α诱导NIH3T3细胞从而使KCTD10基因的表达水平升高,从而得出KCTD10同样能够被TNF-α诱导的结论,因而从功能上证明了KCTD10与PDIP1、TNFAIP1之间的同源性。Northern Blot和实时定量PCR显示KCTD10

论文目录

• 英文缩写表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一部分 材料与方法
• 1 材料
• 1.1 主要仪器设备
• 1.2 菌种和细胞株
• 1.3 载体和工具酶
• 1.4 抗体
• 1.5 试剂盒
• 1.6 其它试剂
• 1.7 所需溶液
• 2 方法
• 2.1 大鼠KCTD10基因的克隆及序列分析
• 2.2 KCTD10基因在各个组织中的表达分析
• 2.3 TNF-α诱导大鼠KCTD10基因的表达
• 2.4 KCTD10与p50，PCNA相互作用分析
• 第二部分 结果与分析
• 1.大鼠KCTD10基因的克隆及序列分析
• 1.1 大鼠脑组织总RNA的提取
• 1.2 大鼠KCTD10基因的克隆
• 1.3 大鼠KCTD10基因的序列分析
• 2 大鼠KCTD10基因在各个组织中的表达分析
• 3 TNFα诱导KCTD10基因的表达
• 4 KCTD10基因与p50，PCNA相互作用分析
• 4.1 免疫共沉淀表达载体的构建
• 4.2 KCTD10与PCNA和p50的免疫共沉淀分析
• 第三部分 讨论
• 参考文献
• 发表论文
• 致谢
• 附录Ⅰ
• 附录Ⅱ