猪链球菌2型与胶原蛋白的黏附作用

论文摘要

猪链球菌(Streptococcus Suis)是一种引起猪败血症、脑膜炎症、心内膜炎和关节炎的主要病原,也是一种重要的人畜共患病病原。根据荚膜多糖将其分为35个血清型,其中2型是流行最广的一种血清型。1990年首次报道在广东省发现猪链球菌2型疑似病例(黄毓茂等,1990)。1998～1999年江苏省江苏某地猪群爆发了急性败血性传染病,并感染特定人群,经鉴定其病原不是以往的C群链球菌,而是猪链球菌2型,属于兰氏分群的R群。我国对猪链球菌病的研究以往主要限于C、D、E、L等群,对2型研究的很少。为了初步建立一种间接ELISA诊断试剂盒,制备了细菌的多克隆抗体,并检测抗体的滴度是1/512。采用包被全菌的方法,初步确定了菌体的最佳包被浓度,包被条件、封闭时间、被检血清最佳稀释度、辣根过氧化物酶标记羊抗兔lgG的最佳稀释度和反应时间等。为猪链球菌2型病的初步诊断奠定了基础。细菌黏附于宿主细胞是黏附于粘膜的第一步,而细菌黏附于宿主细胞可以最终导致宿主菌血症或败血症。猪链球菌能侵入人源和猪源上皮和内皮细胞已经被证实。然而细菌和这些细胞如何相互作用的仍不清楚。在猪链球菌2型的致病机理中,大多数学者认为细菌粘附吞噬细胞而不被其完全吞噬,吞噬细胞带毒在宿主体内散播,因此,黏附在致病作用中有着很重要的作用。最近有的学者报道纤维连接蛋白可能是细菌定植于组织的潜在受体。本试验初步研究了细菌与细胞外基质其中一种胶原蛋白的黏附作用。采用Elisa的方法研究了猪链球菌2型与胶原蛋白的黏附作用。结果表明:猪链球菌2型(高致病株)与猪胶原蛋白Ⅰ型的黏附力显著高于低致病菌株马链球菌兽疫亚种C7463(P＜0.01),经胰酶、蛋白激酶K和加热预处理的细菌的黏附力几乎被完全抑制(P＜0.01),而胆固醇和半乳糖预处理的细菌的黏附力部分被抑制。由此可推断细菌黏附胶原蛋白的配基很可能是蛋白质性质的,细菌的毒力因子荚膜多糖可能没有参与黏附过程,但溶血素参与了细菌与胶原蛋白的黏附过程。因此,我们认为细菌与胶原蛋白的粘附性是多种因素共同参与完成的结果,总之,其黏附机制还有待于进一步的研究。

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摘要

ABSTRACT

英文缩写词汇表（Abbreviation）

文献综述

1 猪链球菌2型毒力因子研究进展

1.1 荚膜多糖

1.2 溶菌酶释放蛋白与胞外因子

1.3 溶血素

1.4 黏附素

1.5 谷氨酸脱氢酶

1.6 甘油醛-3-磷酸脱氢酶

1.7 纤连蛋白结合蛋白

1.8 IgG结合蛋白

1.9 其他可能与毒力相关的物质

2 SS2与细胞黏附研究进展

2.1 SS2与上皮细胞的黏附

2.2 SS2与血管内皮细胞的黏附

2.3 SS2与吞噬细胞的黏附

3 SS2的致病机理

4 细胞外基质

4.1 细胞外基质的概念

4.2 细胞外基质的粘附性

研究目的意义:

试验一猪链球菌的基本特性

1 材料方法

1.1 菌种来源

1.2 试验动物

1.3 主要仪器

2 细菌的培养

2.1 细菌形态学的观察

2.2 菌落计数

2.3 细菌生长曲线的测定

2.4 细菌生化特性

2.5 细菌溶血性的检测

2.6 SC-19荚膜多糖的提取纯化

2.6.1 荚膜多糖浓度的测定

3 结果与分析

3.1 链球菌形态学观察

3.2 细菌生长曲线

3.3 细菌生化特点

3.4 细菌溶血性

3.5 SC-19荚膜多糖的提取及浓度的测定

4 讨论

试验二猪链球菌2型多克隆抗体的制备及免疫学检测方法的建立

1 材料与方法

1.1 药品及试剂

1.2 仪器与设备

1.3 试验动物

2 细菌多克隆抗体的制备

2.1 免疫的方法

2.2 抗体滴度的检测

3 免疫学检测方法的建立

3.1 间接ELISA的步骤

3.2 酶标板均一性的测定

3.3 抗原包被条件的确定

3.4 封闭时间的确定

3.5 酶标二抗最佳反应浓度的确定

3.6 被检血清的最佳反应时间的确定

3.7 酶标二抗最佳反应时间的确定

3.8 底物最佳反应时间的确定

3.9 抗原的最佳包被浓度和被检血清最佳稀释倍数的确定

4 结果与分析

5 讨论

试验三细菌与胶原蛋白的粘附性的研究

1 材料和方法

1.1 菌株

1.2 药品和试剂

2 试验方法

2.1 细菌培养

2.2 ELISA检测细菌粘附力的方法

2.3 抑制性试验

3 数据处理

4 结果与分析

4.1 猪链球菌与胶原蛋白的黏附

4.2 猪链球菌2型与猪胶原蛋白Ⅰ型的黏附力受条件影响

4.3 抑制性试验

5 讨论

6 结论

参考文献

致谢

附录

猪链球菌2型与胶原蛋白的黏附作用

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