小鼠胸腺T细胞淋巴瘤模型的建立

论文摘要

【目的】通过腹腔注射DNA烷化剂N-甲基-N-亚硝基脲（MNU）诱导小鼠胸腺淋巴瘤,建立相应动物模型;应用组织形态学、免疫表型、超微结构观察及巢式聚合酶链反应（PCR）方法鉴定肿瘤细胞来源并分型。【方法】1.第一部分,选用6～8周龄C57BL/6小鼠52只,随机分实验组40只和对照组12只。实验组小鼠腹膜腔内注射新鲜配制MNU诱导液（50mg/kg体重）;对照组腹膜腔内注射等量生理盐水,共注射2次（分别于第0、8周）。注射后观察动物一般情况,对濒死及死亡小鼠进行解剖观察。第22周采用颈椎脱位法处死全部小鼠,解剖检查胸腺淋巴瘤的发生及其他脏器情况。2.第二部分,应用光镜和透射电镜,对诱发的胸腺淋巴瘤及其侵袭脏器进行研究,分析其组织学及超微结构特点。通过免疫组织化学方法（所选抗体有CD3、CD20、TdT及PCNA）鉴定肿瘤细胞来源、分型。3.第三部分,采集8例实验组胸腺淋巴瘤组织及4例对照组胸腺组织,迅速放入液氮罐内,后置入-70℃冰箱冻存。提取基因组DNA,采用巢式PCR方法,对采集样本进行T细胞受体β链（TCRβ）和γ链（TCRγ）克隆性基因重排分析,并对TCRγ基因重排的PCR产物直接测序。【结果】1.实验后期,实验组小鼠体重明显下降。第22周,67.5%（27?40）实验组小鼠产生胸腺淋巴瘤。不同性别对成瘤率影响无明显差异。77.8%胸腺淋巴瘤合并其他脏器侵犯。2. 27例胸腺淋巴瘤光镜下主要表现为:胸腺结构破坏,代之以弥漫分布的中等大小淋巴样细胞,细胞形态比较一致,胞质稀少,核圆形、卵圆形或扭曲核,染色质细腻,核仁显著,核分裂象多见,可见“星空”现象。免疫组化显示瘤细胞表达CD3和TdT。超微结构观察,瘤细胞平均直径7.02±1.12μm,表面无突起,核形相对规则或伴有扭曲核,核仁靠近核膜,核浆比例高,胞质内细胞器极少,凋亡细胞易见。3. 8例胸腺淋巴瘤检测TCRβ和TCRγ均呈克隆性基因重排,阳性率100%;4例对照组胸腺组织均未检测到TCRβ或TCRγ克隆性基因重排。DNA序列测定证实TCRγ基因PCR扩增产物为基因重排产物。【结论】1.腹腔分次注射MNU可以诱导小鼠产生胸腺淋巴瘤,其生物学行为与人类肿瘤相似。2.结合光镜、免疫组化和电镜检查结果,证实所有肿瘤为胸腺T淋巴细胞起源的前驱淋巴母细胞淋巴瘤。3.巢式PCR TCRβ和TCRγ的基因重排检测及DNA序列分析证实,MNU诱导的小鼠胸腺淋巴瘤实际上是T淋巴细胞的单克隆性增生,是来源于T细胞的肿瘤。总之,MNU诱导的小鼠胸腺淋巴瘤在生物学行为、形态学、免疫表型和遗传学方面均与人类相应肿瘤极其相似,可作为人类这一肿瘤实体的理想动物模型。

论文目录

• 英文缩略词对照表
• 中文摘要
• Abstract
• 第一部分 N-甲基-N-亚硝基脲诱导小鼠胸腺淋巴瘤动物模型
• 前言
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 第二部分 小鼠胸腺淋巴瘤组织学、免疫表型及超微结构观察
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 第三部分 PCR 检测小鼠胸腺 T 细胞淋巴瘤TCR 克隆性基因重排
• 前言
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 小结
• 致谢
• 文献综述
• 研究生期间发表论文目录