VitC、NAC对C2C12细胞增殖和凋亡的影响

论文摘要

目的:制备慢性阻塞性肺疾病（COPD）大鼠模型,观察膈肌、趾长伸肌的凋亡率以及各试验组血清中丙二醛的含量;以抗氧化剂VitC、N-乙酰半胱氨酸（NAC）对体外培养的骨骼肌成肌细胞(C2C12)进行干预,探讨抗氧化剂对C2C12细胞增殖、凋亡的影响。方法:经检疫合格的Wistar单纯雄性大鼠100只随机分为模型组80只,对照组20只。模型组采用熏香烟加气管内滴入猪胰弹性蛋白酶（PPE）的方法建立COPD大鼠模型;对照组不熏香烟,在模型组气管内注入PPE的同时采用同一术式在气管内注入等量的无菌生理盐水,其它饲养条件等同。模型制作成功后,以低于对照组大鼠平均体重的90%作为判断发生营养不良的标准,将大鼠重新分为健康对照组、COPD模型营养正常组、COPD模型营养不良组共三组,行肺功能测定处死大鼠后,每组随机选取18只大鼠取血清、膈肌以及趾长伸肌标本,进行以下测定:1.采用硫代巴比妥酸（TBA）比色法测定血清中丙二醛（MDA）的含量;2.脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL）测定大鼠膈肌、趾长伸肌凋亡率;3.体外培养C2C12细胞,观察抗氧化剂VitC、NAC对C2C12细胞的生长曲线以及以Annexin V-PI双染法测C2C12细胞凋亡率。结果:（1）肺功能检测示COPD组大鼠FEV0.3（ml）、FEV0.3/FVC（%）以及PEF（ml/s）均低于对照组（P均＜0.01）,说明存在明显气流受限;COPD组大鼠肺组织经HE染色符合COPD病理改变;（2）COPD营养不良组膈肌、趾长伸肌的凋亡率明显增加,有统计学意义（P＜0.01）;（3）COPD营养不良组较COPD营养正常组、对照组大鼠血清中反映氧化物的丙二醛含量明显增高（P＜0.001）;（4）抗氧化剂VitC和NAC都显示了对体外培养的处于氧化应激状态C2C12细胞具有抑制凋亡的作用（P＜0.001）,干预36h时高浓度的VitC比单纯DMEM/F12培养基有促进C2C12细胞增殖的作用（1.292±0.026,1.208±0.085,P＜0.05）;（5）细胞流式法表明,抗氧化剂能够抑制C2C12细胞的凋亡,高浓度的VitC凋亡率最低。结论:（1）COPD模型鼠体内活性氧产生增多,膈肌和趾长伸肌凋亡率增加,提示氧化应激可能导致了呼吸肌等骨骼肌细胞凋亡;（2）体外细胞培养表明,VitC、NAC能够抑制处于氧化应激状态的C2C12细胞的凋亡,而且高浓度的VitC可能对C2C12细胞有增殖作用。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 前言
• 1.1 材料
• 1.1.1 实验动物
• 2C₁₂细胞'>1.1.2 C₂C₁₂细胞
• 1.1.3 主要试剂
• 1.1.4 主要仪器
• 1.2 方法
• 1.2.1 分组及编号
• 1.2.2 溶液配置
• 1.2.3 构建COPD模型
• 1.2.4 细胞培养及干预
• 1.3 统计学分析
• 第二章 结果
• 2.1 COPD模型判定
• 2.1.1 大鼠一般情况
• 2.1.2 肺组织病理改变
• 2.1.3 肺功能检测
• 2.1.4 体重变化趋势
• 2.2 血清丙二醛测定
• 2.3 TUNEL法测定骨骼肌凋亡
• 2C₁₂生长曲线'>2.4 MTT法绘制C₂C₁₂生长曲线
• 2.4.1 细胞干预时OD值
• 2.4.2 无干预的细胞生长曲线
• 2.4.3 细胞在过氧化氢培养中的生长曲线
• 2.4.4 干预组细胞的生长曲线
• 2.5 流式细胞术检测细胞凋亡
• 第三章 讨论
• 3.1 COPD模型制备及评价
• 3.2 COPD模型组氧化应激水平和骨骼肌凋亡
• 3.3 抗氮化剂对成肌细胞增殖和凋亡的影响
• 第四章 结论
• 参考文献
• 附录一
• 附图1 实验大鼠肺组织病理学图片
• 附图2 膈肌、趾长伸肌凋亡图
• 附图3 细胞生长曲线
• 2C₁₂细胞生长情况'>附图4 36h实验组C₂C₁₂细胞生长情况
• 2C₁₂细胞凋亡图'>附图5 C₂C₁₂细胞凋亡图
• 附录二 综述
• 致谢