地黄轮纹病病原学及防治研究

论文摘要

地黄是我国常用大宗中药材,河南省是地黄主要产区,年种植面积有6000公顷左右,种植地黄已经成为农户的重要经济来源。地黄规模化栽培过程中,病害发生严重,是导致地黄严重减产和质量下降的主要原因。近年来地黄轮纹病频繁爆发,成为制约地黄生产的重要叶部病害。经调查,地黄轮纹病6月开始出现零星病叶,整个生育期均有危害,河南产区100%的地黄田块均有发病,平均病情指数达到40。由于地黄轮纹病的研究较少,生产中并没有很好的防治方法。本文针对地黄轮纹病的发生危害,鉴定了地黄轮纹病的病原,研究了病原的生物学特性,并调查了该病害的发生规律,筛选出有效的化学药剂和生防菌,为地黄轮纹病的防治提出了切实可行的策略。通过形态学和分子生物学鉴定,确定了地黄轮纹病的病原为草茎点霉（Phoma herbarum）,草茎点霉危害地黄是首次报道。病原的分生孢子器在叶片组织上,初埋生,后突破表皮,散生或聚生,分生孢子器球型、扁球形,直径120-210μm。分生孢子单孢、无色,棒状、椭圆形,大小为4～5μm×1.5～2μmm.研究了草茎点霉的生物学特性,结果表明,PDA、地黄煎汁培养基和燕麦培养基利于菌丝的生长,胡萝卜培养基产生孢子器最多；菌落生长的最适温度为25℃,5℃以下和35℃以上病原菌都不能良好生长,病原菌分生孢子的致死温度为53℃；12小时光暗交替培养菌落生长速度最快,pH5-7条件下菌落均能良好生长,最适生长环境是pH6。葡萄糖是草茎点霉固体培养的最佳碳源,可溶性淀粉是液体培养最佳碳源,酵母浸出物是病原菌的最佳氮源。不同的病残体越冬,病原均能存活,侵染越冬地黄的病原生活力最强。地黄轮纹病从6月份出现零星病叶,7月份降雨后,病害开始大规模发生,8、9月份气候条件高温高湿,是病害的盛发期,连续降雨会造成病害的大爆发。起埂栽培地黄轮纹病病情指数低,病害发生轻。抗育831和郭里毛对轮纹病表现高抗,85-5表现中抗,北京3号是发病最重的感病品种。两年的药剂防治试验可以看出,25%阿米西达悬浮剂1000倍喷雾防治地黄轮纹病,防效都达到极显著水平,可以做为地黄轮纹病的无公害防治药剂。通过对地黄内生菌进行筛选,067、0831-b和xb对P. herbarum都有很好的拮抗作用,0831-b和xb离体叶片生防效果达到了90%和80%,表明地黄内生菌能够作为生防菌,应用于地黄轮纹病的防治。根据研究结果,制定了地黄轮纹病综合防治策略：1)使用85-5、抗育831和郭里毛等抗病品种,利用野生资源继续选育新的抗病品种。2)选择透水性好的沙壤土,开沟起埂种植,开挖排水沟,降低田间的温、湿度。3)及时清理病残体,隔开种栽繁殖田和地黄种植田,减少病害初侵染源。4)6月底或7月初未发病时进行预防,雨后及时补喷。可使用25%阿米西达250mg/L25%戊唑醇250mg/L、8%宁南霉素133.3mg/L和70%代森锰锌1400mg/进行交替施药防治。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 文献综述
• 1 地黄
• 1.1 地黄药用价值
• 1.2 地黄种植现状
• 2 地黄病害研究现状
• 2.1 地黄枯萎病
• 2.1.1 地黄枯萎病的发生危害
• 2.1.2 地黄枯萎病的病原
• 2.1.3 地黄枯萎病的防治
• 2.2 地黄病毒病
• 2.2.1 地黄病毒病的危害
• 2.2.2 地黄病毒病的病原
• 2.2.3 地黄脱毒技术
• 2.3 地黄斑枯病
• 2.3.1 地黄斑枯病的发生危害
• 2.3.2 地黄斑枯病的病原
• 2.3.3 地黄斑枯病的防治
• 2.4 地黄轮纹病
• 2.4.1 地黄轮纹病的发生危害
• 2.4.2 地黄轮纹病的病原
• 3 茎点霉属的病原学研究
• 3.1 茎点霉的危害
• 3.2 茎点霉的鉴定
• 4 内生菌生物防治研究进展
• 4.1 内生菌多样性
• 4.2 内生菌生防机理
• 4.3 内生菌生防优势
• 4.4 内生菌生防应用
• 4.5 内生菌致病性
• 5 研究目的和意义
• 第二章 地黄轮纹病的病原鉴定
• 1 材料与方法
• 1.1 标本采集及症状观察
• 1.2 病原菌分离
• 1.2.1 组织分离培养
• 1.2.2 稀释分离法
• 1.3 病原菌致病性测定
• 1.3.1 菌丝块接种
• 1.3.2 孢子悬浮液接种
• 1.3.3 病原菌的再次分离
• 1.4 病原菌培养性状、形态观察
• 1.4.1 直接镜检
• 1.4.2 病原物培养观察
• 1.5 rDNA-ITS分子鉴定
• 1.5.1 菌丝准备
• 1.5.2 DNA提取
• 1.5.3 PCR扩增
• 1.5.4 PCR产物的纯化、回收及序列测定
• 2 结果与分析
• 2.1 地黄轮纹病症状
• 2.2 地黄轮纹病的采集和病原分离
• 2.3 致病性测定结果
• 2.3.1 菌丝块接种
• 2.3.2 分生孢子悬浮液接种
• 2.4 病原菌形态学鉴定
• 2.4.1 直接镜检
• 2.4.2 培养形态
• 2.4.3 形态鉴定依据
• 2.5 rDNA-ITS分子鉴定
• 3 结论与讨论
• 第三章 地黄轮纹病病原生物学特性
• 1 材料与方法
• 1.1 不同培养基上菌落形态观察
• 1.1.1 供试培养基
• 1.1.2 培养形态观察
• 1.2 不同温度对病原菌菌丝生长的影响
• 1.3 光照对病原菌菌丝生长的影响
• 1.4 不同pH值对病原菌菌丝生长的影响
• 1.4.1 固体培养
• 1.4.2 液体培养
• 1.5 不同碳源对病原菌菌丝生长及产孢量的影响
• 1.5.1 固体培养
• 1.5.2 液体培养
• 1.6 不同氮源对病原菌菌丝生长及产孢量的影响
• 1.6.1 固体培养
• 1.6.2 液体培养
• 1.7 分生孢子的致死温度测定
• 1.7.1 致死温度范围选定
• 1.7.2 致死温度确定
• 1.8 数据统计分析
• 2 结果与分析
• 2.1 不同培养基菌落培养性状
• 2.2 不同温度对菌落生长的影响
• 2.3 光照对病原菌生长的影响
• 2.4 不同pH值对病原茵生长的影响
• 2.4.1 液体培养
• 2.4.2 固体培养
• 2.5 碳源对病原菌生长的影响
• 2.5.1 固体培养
• 2.5.2 液体培养
• 2.6 氮源对病原菌生长的影响
• 2.6.1 固体培养
• 2.6.2 液体培养
• 2.7 分生孢子的致死温度测定
• 3 结论与讨论
• 第四章 地黄轮纹病的发生规律和防治
• 1 材料与方法
• 1.1 田间发病规律调查
• 1.1.1 地黄轮纹病调查田安排
• 1.1.2 系统调查方法
• 1.1.3 田间气候统计
• 1.2 病原茵越冬调查
• 1.3 地黄种质抗性评价
• 1.3.1 试验材料及调查方法
• 1.3.2 抗病性评价方法
• 1.4 不同栽培模式对地黄轮纹病的影响
• 1.5 病害田间防治药剂筛选
• 1.5.1 试验安排
• 1.5.2 调查方法
• 2 结果与分析
• 2.1 地黄轮纹病田间发生规律
• 2.2 病原菌越冬调查
• 2.3 地黄种质抗性评价
• 2.3.1 野生和农家品种
• 2.3.2 栽培品种
• 2.4 不同栽培模式对地黄轮纹病的影响
• 2.5 地黄轮纹病田间药剂防治
• 3 结论与讨论
• 第五章 地黄轮纹病生防内生菌筛选
• 1 材料与方法
• 1.1 内生菌分离
• 1.2 拮抗筛选
• 1.2.1 初筛
• 1.2.2 抑菌测定
• 1.3 生防菌鉴定
• 1.4 抑菌谱测定
• 1.5 离体生防
• 2 结果与分析
• 2.1 内生菌分离统计
• 2.2 拮抗菌筛选
• 2.2.1 内生真菌拮抗筛选
• 2.2.2 内生细菌拮抗筛选
• 2.3 生防菌鉴定
• 2.3.1 内生真菌鉴定
• 2.3.2 内生细菌鉴定
• 2.4 抑菌谱测定
• 2.5 离体接种
• 2.5.1 内生真菌致病性测定
• 2.5.2 细菌离体生防
• 3 结论与讨论
• 参考文献
• 致谢