敬钊缨毛蛛毒素及分离组分对肿瘤细胞体外增殖的抑制作用

论文摘要

随着恶性肿瘤发病率和死亡率的逐年提高,传统的手术辅以放化疗的治疗方法已经相形见绌,寻找疗效确切并且毒副作用轻微的抗肿瘤药物迫在眉睫。中药在我国应用历史悠久,近代药理学研究已经证实有许多中药具有抗肿瘤作用,例如植物类中药半边莲、莪术、石见穿、三尖杉等,以及动物类中药斑蝥、蜂房、全蝎、水蛭、蜣螂、蜈蚣、蟾蜍、土鳖虫、蜘蛛毒素等。蜘蛛毒素是近期才受到广泛关注的一种新型天然活性物质,其成分复杂,主要由多肽神经毒素、酶、核酸、游离氨基酸、单胺组成。目前通过生化手段分离和纯化了多种蜘蛛毒素,并且已探明的蛋白质一级结构毒素与多肽类神经毒素有20种,在我国,目前已从Selenocosmia huwena、Atrax robustus等蜘蛛的粗毒中分离到数十种不同生物活性物质,并对其中的多种活性多肽进行了深入细致研究。蜘蛛毒素具有抗虫、抗菌、镇痛等多种作用,近年来蜘蛛毒素的抗肿瘤作用被逐渐认识,高莉等证实雷氏大疣蛛毒素可以抑制人肝癌BEL-7402细胞的增殖和DNA的合成,并对胃腺癌细胞、食管癌细胞和宫颈癌细胞的增殖也有较强抑制作用,因而蜘蛛毒素成为新型抗肿瘤药物研发的热点材料,但是有关蜘蛛毒素的抗肿瘤组分的分离及其抗肿瘤药理学特性国内外报道很少。本试验以体外培养的A549细胞和Hela细胞作为研究对象,用MTT法和台盼蓝拒染法检测敬钊缨毛蛛毒素及分离组分的体外抗肿瘤作用,以期筛选出能够抑制肿瘤细胞生长的蛋白组分。经检测敬钊缨毛蛛毒素对A549细胞和Hela细胞具有较强的抑制作用（P<0.05）,量效关系和时效关系良好,形态学可观察到细胞凋亡。A549细胞对敬钊缨毛蛛毒素的最低敏感浓度约为：5μg/mL, IC50为25μg/mL; Hela细胞对敬钊缨毛蛛毒素的最低敏感浓度约为：10μg/mL,IC50为40μg/mL。利用反相层析分离敬钊缨毛蛛毒素,得到19个组分,其中组分1和2对A549细胞和Hela细胞有较强的抑制作用（P<0.05）,量效关系和时效关系良好；同时SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳表明,活性组分1和2是由分子量在4.1kDa左右的电泳纯多肽组成。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 引言
• 第1章 文献综述
• 1.1 抗肿瘤药物研究现状及进展
• 1.1.1 传统抗肿瘤药物分类
• 1.1.2 抗肿瘤药物研究进展
• 1.1.3 抗肿瘤中草药
• 1.2 动物毒素抗肿瘤研究进展
• 1.2.1 蛇毒
• 1.2.2 蝎毒
• 1.2.3 蟾蜍毒
• 1.2.4 蜂毒
• 1.2.5 水蛭毒
• 1.2.6 蜘蛛毒
• 1.3 蜘蛛毒素的研究现状与进展
• 1.3.1 蜘蛛毒素的研究概况
• 1.3.2 蜘蛛毒素的应用研究
• 1.3.3 蜘蛛毒素与新药研发
• 第2章 敬钊缨毛蛛毒素对肿瘤细胞体外增殖的抑制作用
• 2.1 实验材料
• 2.2 主要仪器与试剂
• 2.2.1 主要仪器
• 2.2.2 主要试剂
• 2.2.3 主要试剂的配制
• 2.3 实验方法
• 2.3.1 肿瘤细胞的体外培养、传代、冻存和复苏
• 2.3.2 MTT法检测敬钊缨毛蛛毒素的抗肿瘤活性
• 2.3.3 台盼蓝拒染法检测敬钊缨毛蛛毒素抗肿瘤活性
• 2.3.4 统计学处理
• 2.3.5 细胞形态学研究
• 2.4 结果与讨论
• 2.4.1 MTT法检测敬钊缨毛蛛毒素对HeLa细胞和A549细胞增殖的抑制作用
• 2.4.2 台盼蓝拒染法检测敬钊缨毛蛛毒素对两株肿瘤细胞细胞增殖的抑制作用
• 2.4.3 倒置相差显微镜观察细胞基本形态学的变化
• 第3章 敬钊缨毛蛛毒素抗癌组分的分离纯化及活性鉴定
• 3.1 实验材料
• 3.2 实验仪器
• 3.3 试剂和药品
• 3.3.1 低分子量标准蛋白
• 3.3.2 反相层析分离平衡、洗脱液
• 3.3.3 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳溶液
• 3.4 实验方法
• 3.4.1 反相层析法分离敬钊缨毛蛛毒素
• 3.4.2 MTT法检测分离组分的抗肿瘤活性
• 3.4.3 活性组分的SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳
• 3.5 结果与讨论
• 3.5.1 反相层析结果
• 3.5.2 MTT法检测敬钊缨毛蛛毒素分离组分两株肿瘤细胞增殖的抑制作用
• 3.5.3 活性组分的SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳
• 3.5.4 敬钊缨毛蛛毒素组分1对两株肿瘤细胞抑制作用的量效时效关系
• 3.5.5 敬钊缨毛蛛毒素组分2对两株肿瘤细胞抑制作用的量效时效关系
• 第4章 结论与创新点
• 参考文献
• 致谢