论文摘要
目的：本课题应用小鼠骨髓来源树突细胞（Dendritic Cell, DC）刺激同种异系小鼠T淋巴细胞,应用低色氨酸培养基及色氨酸代谢产物抑制T淋巴细胞增殖,并揭示其抑制T淋巴细胞增殖机制。方法：采用培养基细胞因子选择法体外培养小鼠骨髓来源DC,流式细胞仪检测DC表面抗原CD80、CD86、MHCⅡ、CD11c表达情况,在加入色氨酸代谢产物的低色氨酸培养基中混合淋巴细胞培养并观察对异系T淋巴细胞增殖能力的影响。利用Annexin-V及PI双染法测定T细胞凋亡情况。使用SPSS 15.0软件包进行数据分析。结果：经过体外培养,每只小鼠可获得5-6×106个骨髓来源DC,细胞具备典型树突状结构,高表达CD80 （94.56%）、CD86 （88.42%）、MHC-Ⅱ（86.12%）、CD11c（96.79%）。经免疫磁珠法可分离出纯度达90%以上的CD4+T细胞,进行混合淋巴细胞培养,低色氨酸组较正常色氨酸组刺激指数（SI）明显降低（P<0.001）,加入色氨酸代谢产物KYN组、3-HK组、3-HAA组SI值均随其浓度升高而明显降低,且与对照组相比具有统计学差异（P<0.001）。其中以3-HAA抑制CD4+T细胞增殖作用最明显,所需浓度最低。低色氨酸培养基与色氨酸代谢产物对CD4+T细胞增殖的抑制具有叠加作用。Annexin-V及PI双染法测定各组CD4+T细胞凋亡低色氨酸组凋亡率明显升高,且加入色氨酸代谢产物后凋亡率进一步升高（P<0.001）。结论：培养基细胞因子选择法可收获大量的骨髓源DC,免疫磁珠法可分离纯度较高的CD4+T细胞。低色氨酸培养基及色氨酸代谢产物均可抑制CD4+T细胞增殖,并且二者具有叠加效应。其造成CD4+T细胞增殖抑制的机制为“色氨酸饥饿”和“色氨酸代谢产物毒性作用”造成细胞生长停滞甚至凋亡。这为进一步研究器官移植后的免疫耐受提供了实验基础。