原白头翁素衍生物对人肺癌A549细胞株的诱导凋亡和抗增殖作用的实验研究

论文摘要

目的:探讨原白头翁素衍生物（5-溴甲基-呋喃-2酮）对人肺癌A549细胞株的诱导凋亡和抗增殖作用及其机制,为开发抗肿瘤新中药提供实验依据。方法:应用MTT法测定原白头翁素衍生物对人肺癌A549细胞株的生长抑制作用;通过倒置显微镜、光学显微镜、吖碇橙（AO）/溴化乙啶（EB）染色荧光显微镜观察肿瘤细胞凋亡的形态学变化;TUNEL法检测细胞凋亡率;应用免疫细胞化学技术检测药物处理前后增殖细胞核抗原Ki-67及凋亡相关基因Bcl-2、Bax的基因蛋白表达。结果:MTT法检测结果,5μg/ml-20μg/ml原白头翁素衍生物对人肺癌A549细胞株有明显的抑制生长的作用,且呈现出浓度和时间的依赖性。倒置显微镜观察结果,实验组肿瘤细胞体积变小、变圆,核染色质凝集,细胞间连接疏松,贴壁能力减弱;HE染色观察结果,实验组肿瘤细胞体积变小、变圆,核染色质浓缩或染色质块形成,有的细胞膜起泡形成凋亡小体;AO/EB荧光染色观察结果,实验组肿瘤细胞核染色质呈橘红色,胞质内的橘红色或橘黄色荧光消失,细胞周围可见亮绿色的凋亡小体。TUNEL染色法检测结果,药物在5μg/ml-20μg/ml范围内均能诱导肺癌A549细胞株凋亡,肿瘤细胞凋亡率随药物浓度的增高而上升,表现出浓度依赖性关系,当药物作用48h其AI达高峰:免疫细胞化学ki-67抗原检测结果,ki-67阳性表达率随药物浓度的提高和作用时间的延长而降低,表现出浓度和时间的依赖性关系;凋亡相关基因表达检测结果,实验组Bcl-2基因蛋白阳性表达率明显降低,而Bax基因蛋白阳性表达率明显升高。结论:1)原白头翁素衍生物对人肺癌A549细胞株有抑制增殖作用,呈明显的量效和时效关系。2)原白头翁素衍生物对人肺癌A549细胞株有诱导凋亡的作用。3)原白头翁素衍生物通过干扰细胞周期抑制人肺癌A549细胞的生长;其诱导人肺癌A549细胞株凋亡的分子生物学机制可能与下调凋亡抑制基因Bcl-2的表达和上调促凋亡基因Bax的表达有关。

论文目录

• 缩略词表
• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 前言
• 第二章 材料与方法
• 1 材料
• 1.1 肿瘤细胞株
• 1.2 药物、试剂
• 1.3 主要仪器
• 2 方法
• 2.1 细胞复苏与培养
• 2.2 实验分组及药物处理
• 2.3 MTT法体外细胞毒活性测定
• 2.4 肿瘤细胞形态学观察
• 2.5 TUNEL检测细胞凋亡
• 2.6 免疫细胞化学染色
• 3 统计学处理
• 第三章 结果
• 1 MTT法检测原白头翁素衍生物对人肺癌A549细胞株增殖的影响
• 2 形态学观察原白头翁素衍生物对人肺癌A549细胞株的诱导凋亡作用
• 2.1 倒置显微镜观察
• 2.2 HE染色光镜观察
• 2.3 AO/EB染色荧光显微镜观察
• 3 TUNEL法检测原白头翁素衍生物作用于人肺癌A549细胞株的诱导凋亡作用
• 4 免疫细胞化学法检测原白头翁素衍生物对人肺癌A549细胞株的抗增殖作用
• 5 免疫细胞化学法检测原白头翁素衍生物对人肺癌A549细胞凋亡相关基因蛋白表达的影响
• 第四章 讨论
• 第五章 结论
• 致谢
• 参考文献
• 附图
• 综述
• 参考文献