山茱萸多糖的分离、纯化及生物活性初步研究

山茱萸多糖的分离、纯化及生物活性初步研究

论文摘要

山茱萸是我国传统中药材,产量丰富,具有多种生物活性。本文对山茱萸多糖进行了提取、分离、纯化和理化性质研究,并且对多糖样品的体外抗氧化和免疫活性进行了初步研究。对山茱萸多糖进行了超声提取和热水浸提两种方法的工艺比较研究。通过单因素和正交实验对山茱萸多糖提取工艺条件进行优化,确定山茱萸多糖提取的最佳工艺参数。热水浸提法最佳工艺条件为:温度80℃、加水量60倍、提取时间5h、提取2次;超声提取法的最佳工艺条件为:超声功率400W、加水量60倍、提取时间40min。结果表明:与热水浸提法相比,超声提取法的提取率高,效率高,能源消耗低。分别对超声提取和热水浸提的多糖进行纯化,纯化步骤是:热水(超声)提取,乙醇沉淀,Sevag法除蛋白,采用DEAE-52离子交换柱和Sephadex G-200凝胶柱分离纯化,得到2种纯化多糖S2(超声提取)F4(热水提取)。并对二者进行性质比较以验证超声提取方法的可行性。结果表明:超声提取与热水浸提法所得到的多糖无差别,因此超声提取法具有较大的应用前景和市场价值。对山茱萸多糖S2体外抗氧化作用进行研究,结果显示:S2具有较好的还原性,可以有效的清除超氧阴离子自由基;羟基自由基和DPPH自由基。对山茱萸多糖S2的体外免疫活性进行研究,结果显示:S2可直接促进小鼠的脾细胞存活,并对ConA和LPS诱导的脾细胞增值有协同作用,对小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能无明显作用。

论文目录

  • 摘要
  • ABSTRACT
  • 目录
  • 第1章 绪论
  • 1.1.山茱萸药理作用研究概述
  • 1.2 多糖研究概述
  • 1.3 山茱萸多糖研究概述
  • 1.4 本课题的目的和意义
  • 1.5 本课题的主要内容及技术路线
  • 第2章 山茱萸多糖提取工艺研究
  • 2.1 实验材料与试剂及仪器
  • 2.2 实验方法
  • 2.2.1 山茱萸原料的实验前处理
  • 2.2.2 提取流程图
  • 2.2.3 苯酚硫酸法测定总糖含量
  • 2.3 结果与分析
  • 2.3.1 热水提取工艺条件的单因素分析
  • 2.3.2 热水提取工艺条件的正交实验
  • 2.3.3 超声提取工艺条件的单因素分析
  • 2.3.4 超声提取工艺条件的正交实验
  • 2.3.5 山茱萸多糖的糖含量测定
  • 2.3.6 本章小结
  • 第3章 山茱萸多糖分离纯化研究
  • 3.1 实验材料与试剂及仪器
  • 3.2 实验方法
  • 3.2.1 山茱萸多糖的提取
  • 3.2.2 山茱萸粗多糖脱蛋白
  • 3.2.3 DEAE-52离子交换柱层析
  • 3.2.4 纯度测定
  • 3.2.5 相对分子量测定
  • 3.2.6 离子色谱分析
  • 3.2.7 红外光谱测定糖苷键构型
  • 3.2.8 比旋光度法
  • 3.2.9 多糖元素分析
  • 3.2.10 多糖理化性质分析
  • 3.3 结果与分析
  • 3.3.1 粗多糖分离纯化
  • 2和F2比旋光度测定'>3.3.2 S2和F2比旋光度测定
  • 3.3.3 相对分子量测定
  • 3.3.4 离子色谱分析
  • 3.3.5 红外光谱分析
  • 3.3.6 比旋光度测定
  • 3.3.7 元素组成分析
  • 3.3.8 理化性质分析
  • 3.4 本章小结
  • 第4章 山茱萸多糖体外抗氧化活性研究
  • 4.1 实验材料与试剂及仪器
  • 4.2 实验方法
  • 4.2.1 多糖的还原能力
  • 4.2.2 多糖对超氧阴离子自由基的清除作用
  • 4.2.3 多糖对羟自由基的清除作用
  • 4.2.4 多糖对DPPH的清除作用
  • 4.3 结果与分析
  • 4.3.1 多糖还原能力的测定
  • 4.3.2 多糖对超氧阴离子自由基的清除作用
  • 4.3.3 多糖对羟自由基的清除作用
  • 4.3.4 多糖对DPPH的清除作用
  • 4.4 本章小结
  • 第5章 山茱萸多糖体外免疫活性研究
  • 5.1 实验材料与试剂及仪器
  • 5.2 实验方法
  • 5.2.1 山茱萸多糖对正常小鼠脾细胞的作用
  • 5.2.2 山茱萸多糖对小鼠巨噬细胞的影响
  • 5.2.3 数掘处理
  • 5.3 实验结果与分析
  • 2对小鼠脾细胞的影响'>5.3.1 山茱萸多糖S2对小鼠脾细胞的影响
  • 2对小鼠巨噬细胞吞噬功能的影响'>5.3.2 山茱萸多糖S2对小鼠巨噬细胞吞噬功能的影响
  • 5.4 本章小结
  • 第6章 结论与展望
  • 6.1 结论
  • 6.2 创新点
  • 6.3 展望
  • 参考文献
  • 附录 硕士研究生期间发表的论文
  • 致谢
  • 相关论文文献

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