炎症和脂代谢紊乱对大鼠肾脏损伤程度影响的实验研究

论文摘要

第一部分高血脂对阿霉素肾病大鼠肾损伤程度的影响目的比较高脂和普通饲料饲养阿霉素肾病大鼠对肾脏病变程度的影响,探讨炎症与脂代谢紊乱在肾损害中的相互作用。方法雄性Wistar大鼠49只（10～11周龄、体重240～275g）,随机分为四组:正常对照组（N）、高脂饲养组（HF）、阿霉素肾病组（ADR）、阿霉素+高脂饲养组（ADR+HF）。N组予普通饲料喂养,并于实验开始尾静脉注射生理盐水对照;HF组饲予高脂饲料（高脂饲料配方:基础饲料+10%猪油+4%胆固醇+1%胆酸钠）,于实验开始尾静脉注射生理盐水对照;ADR组饲普通饲料,于实验开始尾静脉注射阿霉素6mg/kg;ADR+HF组于实验开始尾静脉注射同剂量阿霉素并饲高脂饲料。实验周期为12周,分别于0、4、8、12周检测24h尿蛋白含量,分别于第8周,12周时,麻醉下摘眼球取血并处死大鼠,检测血清TP、ALB、TG、TC、HDL、LDL、BUN、Scr水平;肾组织行HE,PAS病理检查,冰冻切片行苏丹Ⅲ染色观察肾脏脂质沉积情况;电镜下观察肾脏超微结构。结果（1）生化指标:①24小时尿蛋白定量:HF组实验第4、8、12周尿蛋白均较N组有所升高,但无显著性差异（P>0.05）;ADR组和ADR+HF组从第4周起尿蛋白定量均较N组、HF组明显升高（P<0.05）,并呈时间依赖性;ADR+HF组在第8、12周明显高于ADR组（P<0.05）。②血清白蛋白、总蛋白含量:第8周HF组与N组无差异,第12周ALB较N组降低（P<0.05）,TP与N组无差别;ADR组和ADR+HF组,TP及ALB在第8、12周均低于N组（P<0.05）,且以ADR+HF组降低尤甚,低于ADR组（P<0.05）。③血清脂质含量:血清TG:HF组与N组无差别;ADR组及ADR+HF组较N组、HF组明显升高（P<0.05）,其中ADR+HF组升高尤为明显,高于ADR组（P<0.05）;血清TC、LDL:8周起各组均较N组升高（P<0.05）,ADR组及ADR+HF组高于HF组（P<0.05）,且ADR+HF组较ADR组升高（P<0.05）;血清HDL:8周时,ADR组高于N组及HF组（P<0.05）;12周时,ADR组及ADR+HF组较N组及HF组升高（P<0.05）。④肾功能指标:8周,12周时各组血清BUN、Scr水平差异均无显著性。（2）病理检查:①HE染色:8周时HF组肾小球及小管病变轻微,肾小球及间质无炎症细胞浸润;ADR组肾小球细胞数增多,管腔内蛋白管型,肾间质炎症细胞浸润;ADR+HF组肾小球体积增大,肾小球少量炎症细胞浸润及泡沫细胞形成,间质炎症细胞浸润明显。12周时HF组肾小球体积明显增大,小管上皮细胞明显浊肿;ADR组肾小球增大,球囊粘连,肾小球内及间质炎症细胞浸润,数量较8周时增加,小管上皮细胞明显浊肿,大量蛋白管型;ADR+HF组肾小球内及间质炎症细胞浸润明显增多,并有泡沫细胞形成,肾小球蒂部也有较多炎症细胞浸润,大量蛋白管型。②PAS染色:8周时HF组系膜基质轻度增宽;ADR组肾小球系膜细胞增生,系膜基质增宽,基底膜局灶增厚;ADR+HF组病变与ADR组类似,程度稍重。12周时HF组系膜基质增宽程度加重;ADR组系膜基质明显增宽,基底膜明显增厚;ADR+HF组系膜细胞大量增生,系膜基质明显增宽,基底膜广泛增厚,其病变程度较ADR组加重,并可见FSGS改变。③苏丹Ⅲ脂肪染色:8周时HF组肾小管可见少量脂肪沉积;ADR组肾小球及肾小管均有脂肪沉积;ADR+HF组肾小球、肾小管脂肪沉积明显,程度较其余组重。12周时HF组脂肪沉积以肾小管为主,肾小球仅有少量沉积;ADR组及ADR+HF组肾脏脂肪沉积明显较8周时加重,且ADR+HF组脂肪沉积广泛、严重。④电镜下观察情况:8周时HF组足突轻度融合,系膜细胞轻度增生,肾小管上皮细胞内少量脂滴沉积;ADR组系膜轻度增生,足突融合,基底膜局灶性增厚,肾小管上皮细胞内脂滴沉积;ADR+HF组足突完全融合,基底膜明显增厚,系膜区增宽。12周时HF组足突局灶融合,小管上皮细胞内脂滴沉积,病变较8周时加重;ADR组系膜增生明显,足突广泛融合,基底膜明显增厚,肾小管上皮细胞水肿,脂滴沉积;ADR+HF组足突消失,基底膜严重增厚,结构不清,系膜大量增生,肾小管水肿、变性,脂滴沉积。结论高胆固醇血症可引起肾脏炎症细胞浸润及足细胞损伤,小管间质损伤较轻;阿霉素肾病小球、小管均有损伤,但在肾脏发生炎症病变并伴有高胆固醇血症时,肾脏受损程度明显重于仅有高脂血症或单纯肾脏炎症所致的肾损害,提示肾组织中炎症因子和脂质的相互作用加重了肾脏损害。第二部分阿霉素肾病大鼠肾组织中炎症因子对LDLr表达影响的研究目的观察阿霉素肾病大鼠肾组织中炎症因子TNF-α对低密度脂蛋白受体（LDLr）表达的影响,探讨炎症介质与脂质在肾损害中的作用以及脂质肾损害的发病机理。方法采用第一部分实验各组大鼠血清及肾脏组织标本;ELISA方法检测血清TNF-α含量,免疫组织化学、Western印迹检测肾组织TNF-α、LDLr蛋白表达,RT-PCR检测肾组织LDLr mRNA的表达。结果①TNF-α表达情况:实验第8周和12周,HF组血清TNF-α水平与N组无差别,但免疫组化及Western blotting法显示第8周时HF组肾组织中的TNF-α表达已开始升高,与N组比较差异有显著性（P<0.05）。ADR组及ADR+HF组TNF-α血清水平及肾组织中蛋白含量在第8周较N组及HF组升高（P<0.05）,升高程度呈时间依赖性,且ADR+HF组血清及肾组织中TNF-α水平均较ADR组明显升高（P<0.05）。②肾组织LDLr蛋白和mRNA表达从8周起各组均较N组增加（P<0.05）,ADR组升高程度较HF组明显（P<0.05）,ADR+HF组升高尤为显著,两个时间点与HF组,ADR组比较均有差别（P<0.05）,其表达量的增高呈时间依赖性。结论肾组织LDLr的表达不仅受到局部脂质水平影响,同时也受炎症因子的调节。炎症因子可通过刺激肾实质细胞过多表达LDLr影响局部胆固醇代谢反馈调节机制,导致脂质沉积,这为炎症介导脂质肾损害的观点提供了一定的实验依据。反之,组织局部的脂质水平异常也可激活炎症反应。

论文目录

• 符号说明
• 中文摘要
• 英文摘要
• 论文正文：炎症和脂代谢紊乱对大鼠肾脏损伤程度影响的实验研究
• 前言
• 第一部分 高血脂对阿霉素肾病大鼠肾损伤程度影响的实验研究
• 1 材料和方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 第二部分 阿霉素肾病大鼠肾组织中炎症因子对LDLr 表达影响的研究
• 1 材料和方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 全文小结
• 参考文献
• 附图
• 文献综述：脂质、炎症与肾小球硬化
• 致谢
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文