IL-12修饰的小鼠乳腺癌细胞EMT6/IL-12抗肿瘤作用研究

论文摘要

目的:获得可以稳定表达hIL-12蛋白的小鼠乳腺癌细胞株EMT6/IL-12。通过对EMT6/IL-12荷瘤小鼠进行肿瘤生长观察及免疫指标检测,探讨其抗肿瘤作用及其机制。方法:将重组人IL-12真核表达载体pcDNA6/v5-his-p70（pcDNA-p70）转染入小鼠乳腺癌细胞EMT6,经筛选获得稳定转染克隆EMT6/IL-12,并进行表达鉴定。昆明小鼠随机分成三组,1组:EMT6/IL-12组,2组:pcDNA6-p70组,3组:EMT6组。于小鼠右胸皮下接种肿瘤细胞,1组接种EMT6/IL-12细胞,2、3组接种EMT6细胞。于接种肿瘤细胞后的第4、7、10、14、17天给予瘤内注射药物,1、3组注射生理盐水,2组注射pcDNA6-p70质粒。于第21天处死小鼠,剥取瘤体、脾脏和胸腺并称重;分别计算抑瘤率、脾指数和胸腺指数。检测脾淋巴细胞杀伤活性;脾淋巴细胞增殖反应:血清IFN-γ水平;ConA刺激后的脾淋巴细胞CD4/IFN-γ,CD8/IFN-γ双标记阳性细胞的百分率。结果:EMT6/IL-12可以表达较高水平hIL-12蛋白。EMT6/IL-12组荷瘤小鼠抑瘤率（97.08%）较pcDNA6-p70（76.25%）及EMT6组提高（p<0.01）:并且,EMT6/IL-12小鼠的脾及胸腺指数、脾淋巴细胞杀伤活性、脾淋巴细胞增生反应及血清IFN-γ水平均高于对照组（p<0.01）;CFC检测显示,EMT6/IL-12组脾淋巴细胞CD4/IFN-γ（7.49±0.05%）、CD8/IFN-γ（6.35±0.06%）双标记阳性细胞的百分率均高于pcDNA6-p70（CD4/IFN-γ:4.3±0.03%;CD8/IFN-γ:3.7±0.05%）及EMT6组（CD4/IFN-γ:2.05±0.04%;CD8/IFN-γ:1.26±0.03%）（p<0.01）。结论:本研究成功地获得可高效稳定表达hIL-12的EMT6/IL-12细胞株;IL-12修饰的小鼠乳腺癌细胞EMT6/IL-12表现出预期抗肿瘤作用。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 引言
• 第一章 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.1.1 主要试剂和耗材
• 1.1.2 主要仪器
• 1.2 方法
• 1.2.1 制备无内毒素的pcDNA6-p70质粒
• 1.2.2 EMT6/IL-12阳性细胞株的建立及筛选
• 1.2.3 EMT6/IL-12细胞株的鉴定
• 1.2.4 小鼠肿瘤模型的建立与治疗
• 1.2.5 肿瘤生长曲线测定
• 1.2.6 脾淋巴细胞增生试验（MTT法）
• 1.2.7 脾淋巴细胞杀伤实验（乳酸脱氢酶释放）
• 1.2.8 荷瘤小鼠外周血中IFN-γ水平
• 1.2.9 细胞因子流式细胞（cytokine follow cytometry,CFC）检测
• 1.2.10 统计学方法
• 第二章 结果
• 2.1 EMT6转染及阳性克隆的鉴定
• 2.1.1 p70的PCR扩增
• 2.1.2 p70的RT-PCR扩增
• 2.1.3 ELISA方法检测hIL-12蛋白表达的结果
• 2.2 EMT6/IL-12荷瘤小鼠肿瘤生长情况
• 2.3 EMT6/IL-12对荷瘤小鼠细胞免疫功能的影响
• 第三章 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述
• 攻读学位期间的研究成果
• 致谢