论文摘要
目的：检测紫绀型先天性心脏病患者外周血内皮祖细胞（endothelial progenitor cells，EPCs）的数量及功能变化，探讨其作为组织工程带瓣血管种子细胞的可行性。方法：选取法洛四联症患者10例为实验组，单纯室间隔缺损患者10例为对照组，采用Ficoll（葡聚糖）密度梯度离心法从外周血中分离单个核细胞，用添加牛脑垂体提取物和胎牛血清的M199培养基进行体外诱导分化培养。用免疫组化和透射电镜行EPCs表型鉴定；采用流式细胞仪计数CD133+／KDR+细胞；采用改良的Boyden小室，粘附能力测定实验和MTT比色法，评价EPCs的迁移、粘附及增殖能力。结果：1、免疫组化及免疫荧光鉴定结果显示，培养第10天的EPCs绝大多数为CD133+，KDR+，vWF+, CD31+，CD34+。2、透射电镜结果显示，培养第10天EPCs线粒体较幼稚呈空泡状，嵴断裂或减少，甚至消失。可见Weibel-Palade小体（简称W-P小体）紧贴核膜分布。3、培养第7天左右紫绀型先天性心脏病患者和单纯室间隔缺损患者的外周血内皮祖细胞集落记数分别为（14.7±3.1／100倍视野）和（8.2±1.34／100倍视野），经两样本成组t检验，紫绀组集落生成数显著高于对照组（P＜0.01）。4、取培养第7天左右紫绀型先天性心脏病患者和单纯室间隔缺损患者的外周血内皮祖细胞染色，DiI-AcLDL／FITC-UEA-I双阳性细胞数分别为（72.2±9.73／200倍视野）和（51.2±3.83／200倍视野），经两样本成组t检验，紫绀组DiI-AcLDL／FITC-UEA-I双阳性细胞数显著高于对照组（P＜0.01）。5、取紫绀型先天性心脏病患者和单纯室间隔缺损患者新鲜外周抗凝血，流式细胞仪检测CD133／KDR，双阳性细胞百分比分别为（0.66±0.20）％和（0.18±0.08）％，经两样本成组t检验，紫绀组CD133／KDR双阳性细胞数显著高于对照组（P＜0.01）。6、培养第7天左右紫绀型先天性心脏病患者和单纯室间隔缺损患者的外周血内皮祖细胞迁移能力分别为（140.6±9.24／200倍视野）和（91.84±8.58／200倍视野），经两样本成组t检验，紫绀组EPCs迁移能力显著高于对照组（P＜0.01）。7、培养第7天左右紫绀型先天性心脏病患者和单纯室间隔缺损患者的外周血内皮祖细胞粘附能力分别为（149±11.58／200倍视野）和（112.6±7.02／200倍视野），经两样本成组t检验，紫绀组EPCs粘附能力显著高于对照组（P＜0.01）。8、培养第7天左右紫绀型先天性心脏病患者和单纯室间隔缺损患者的外周血内皮祖细胞增殖能力OD值分别为（0.34±0.02）和（0.27±0.01），经两样本成组t检验，紫绀组EPCs增殖能力显著高于对照组（P＜0.01）。结论：1、紫绀型先天性心脏病患者循环内皮祖细胞的数量和含量均较对照组增多。2、紫绀型先天性心脏病患者循环内皮祖细胞的迁移，粘附及增殖能力较对照组增强。3、紫绀型先天性心脏病患者循环内皮祖细胞是构建组织工程血管的良好种子细胞之一。