论文摘要
本研究对来自临床疑似患犬瘟热狗的组织病料进行病毒分离,在Vero细胞上分离得到一株病毒,定名为CDV-1。经传代后,出现稳定的细胞病变,以细胞聚集、圆缩和拉网脱落为特征。通过电镜观察可见,CDV-1病毒粒子主要呈球形,大小为150nm左右,在细胞中分布于细胞浆。在理化试验中,CDV-1 56℃30min被灭活,pH 7.0-8.0病毒活性不受影响,pH 6.0以下和pH 9.0以上病毒活力受到影响。CDV-1有囊膜,不凝集鸡、兔和绵羊红细胞。该病毒接种Vero细胞5d TCID50为10-2.13/ml,7d TCID50为10-4.81/ml,9d TCID50为10-5.35/ml,10d TCID50可达10-5.832/ml。中和试验显示,阳性血清能中和CDV-1吸附细胞,其中和效价为1:13。在动物试验中,选择腹腔注射1×105.8TCID501ml,3×105.8TCID501ml和6×105.8TCID50 1ml 3个梯度的CDV-1活病毒粒子,其中接毒量为6×105.8TCID50 1ml CDV-1的试验犬成功地复制出了典型的犬瘟热临床症状。该组试验犬于攻毒后第4-7d出现食欲废绝、鼻卡他、腹泻、眼角有脓性分泌物,体温呈典型的双相热,最终机体极度衰竭死亡。剖解可见肺尖出血,肝脏肿大、质地变脆,淋巴结肿大,腹腔有积液,肠系膜充血脱落和脾脏边缘出血梗死。刮取膀胱粘膜上皮细胞进行苏木素-伊红染色（HE染色）,可见细胞质中有红色包涵体颗粒。病理切片观察可见肝脏充血、肝细胞出现空泡变性,肺泡壁增厚,气管中有炎性细胞聚集,脾脏中出现大量嗜银染颗粒,白髓区淋巴细胞减少。接种量为3×105.8TCID501ml的2只犬均出现食欲不振、精神沉郁,于攻毒后7d出现轻微的体温升高,但未出现死亡。接种量为1×105.8TCID501ml的2只犬临床症状不明显,而未接种病毒的对照犬,未出现任何临床症状。本研究对比了CDV-1活毒抗原和灭活抗原的免疫原性。将5×103.8TCID50/ml和5×102.8TCID50╱ml日活毒抗原和1×105.8TCID50/ml的灭活病毒抗原分别接种健康幼犬,活毒抗原仅免疫1次（1ml/次）,灭活抗原免疫2次（2ml/次）,于接种后28d经腹腔攻毒,攻毒剂量为5×105.8TCID50/1ml 1ml。采集免疫后5d、10d、20d和27d以及攻毒后7d和12d的血清,经间接ELISA检测发现,活毒抗原诱导的抗体水平低于灭活抗原（0.01＜P＜0.05）。接种5×103.8TCID50/ml的活毒抗原诱导的抗体水平仅略高于接种5×102.8TCID50╱ml的活毒抗原,差异不明显（P＞0.05）,两者在免疫后抗体水平呈现缓慢上升趋势,免疫后4周抗体OD值仅达到0.3。而接种1×105.8TCID50╱ml的灭活病毒抗原能刺激动物产生有效的免疫应答反应,免疫后21d和28d,抗体OD值分别达到0.46和0.49,且抗体水平较稳定。试验显示,所有实验犬的抗体水平与攻毒前相比均有明显的下降,并且进行攻毒后的幼犬产生的抗体水平与相对应的组别同期比较也有明显的下降。