论文摘要
本研究采用混合酸酐法将莱克多巴胺（ractopamine, RCT）分别与钥孔血蓝蛋白（KLH）和卵清蛋白（OVA）偶联,制备免疫抗原（RCT-KLH）和包被抗原（RCT-OVA）。用免疫抗原免疫8周龄雌性Balb/c系小鼠,通过四次免疫后,将小鼠断尾采血,以包被抗原包被酶标板,用间接ELISA法选出血清具有抗RCT的高阳性鼠,取这些小鼠的脾细胞与SP2/0细胞融合,通过检测、克隆、筛选等步骤生产抗RCT单抗。通过以上步骤得到3株具有稳定、特异分泌抗RCT的单克隆抗体,分别命名为2B6（A株）、3D3（B株）、2F7（C株）,通过鉴定3株单抗的效价分别可达到1:8.0×104、1:3.2×105、1:4.0×104。应用间接抑制ELISA将3株单抗与其它结构类似物进行竞争抑制,实验表明,抗RCT单抗对RCT的IC50为40.5ng/ml,对克伦特罗、肾上腺素、去甲肾上腺素、异丙肾上腺素、麻黄碱和氨茶碱的IC50均≥3906ng/ml,这表明抗RCT单抗与异丙肾上腺素的交叉反应为1.02%,与其它一些结构类似物的交叉反应均小于1.02%。应用3株抗RCT单抗,基于间接抑制ELISA方法,建立RCT免疫学检测方法。通过对此方法中的相关条件进行优化,可以使本检测体系对RCT的检测范围达到1.25～1280ng/ml,表明基于此原理建立的检测方法可以用于动物性食品RCT残留的普查。
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