黄江涛：表皮生长因子受体（EGFR）对奶山羊乳腺上皮细胞增殖的初步研究论文

本文主要研究内容

作者黄江涛（2019）在《表皮生长因子受体（EGFR）对奶山羊乳腺上皮细胞增殖的初步研究》一文中研究指出：表皮生长因子受体（Epidermal growth factor receptor,EGFR）是酪氨酸受体家族ErbB中重要成员之一,参与细胞增殖、迁移和分化等过程。本研究以奶山羊乳腺上皮原代细胞为试验材料,过表达EGFR基因并检测对细胞增殖活性的影响;添加EGF以及EGFR信号通路相关蛋白的抑制剂,检测EGFR对细胞增殖的影响、同时检测Akt以及ERK1/2信号通路的激活情况以及细胞周期蛋白的变化。获得的主要研究成果如下:（1）通过对奶山羊乳腺上皮原代细胞中进行不同浓度的EGF（0,12.5,25,50,100 ng/ml）处理,得到适宜乳腺上皮细胞中生长的浓度,结果显示12.550 ng/mL EGF可以促进乳腺上皮细胞的增殖。使用不同浓度AG1478处理奶山羊乳腺上皮细胞,10μmol/L的AG1478可以显著降低细胞增殖活性。成功地将pcDNA3.1-EGFR真核表达载体转染于山羊原代乳腺上皮细胞,RT-qPCR结果显示EGFR基因的mRNA水平上调25倍以上;WB结果显示,过表达EGFR基因与EGF（50 ng/mL）共同处理后,EGFR蛋白的磷酸化水平显著增加（P<0.01）。Hoechst/PI染色结果表明,对过表达EGFR的山羊乳腺上皮细胞进行EGF处理后,细胞数量明显增加;AG1478（10μmol/L）处理使细胞数目明显减少,细胞存活能力明显降低（P<0.01）。流式细胞仪检测发现,EGF（50ng/mL）增加了S期与G2期的细胞比例,AG1478使细胞周期阻滞在G1期,说明EGF对细胞周期的促进作用与EGFR活化关系密切。（2）血清饥饿16 h后,EGF（50 ng/mL）刺激乳腺上皮细胞,EGFR磷酸化水平随EGF处理时间延长而显著增加,ERK1/2和AKT磷酸化明显上升。EGFR抑制剂AG1478（10μmol/L）处理乳腺上皮细胞1 h后,EGF（50 ng/mL）介导的AKT、ERK1/2的磷酸化水平都显著降低。山羊乳腺上皮细胞中添加10μmol/L AG1478或10μmol/L Gefitinib 24 h后发现,P21蛋白水平明显上升,细胞周期蛋白Cyclin E1以及周期蛋白激酶CDK2蛋白水平显著下降。EGF处理乳腺上皮细胞后周期蛋白激酶CDK2表达明显增加;与EGF组相比,500 nmol/ml MK2206及1μmol/ml U0126处理乳腺上皮细胞24 h后,CDK2表达降低,说明EGFR通过下游AKT以及ERK1/2信号蛋白可调控CDK2的表达。综上所述,本试验初步研究了EGFR信号通路在奶山羊乳腺上皮细胞中的作用。通过添加EGF以及EGFR抑制剂,证明了EGFR对奶山羊乳腺上皮细胞增殖具有促进作用,ERK1/2和AKT信号通路可显著调控CDK2激酶的表达,为明确EGFR信号通路在奶山羊乳腺发育中的作用提供了理论依据。

Abstract

biao pi sheng chang yin zi shou ti （Epidermal growth factor receptor,EGFR）shi lao an suan shou ti jia zu ErbBzhong chong yao cheng yuan zhi yi ,can yu xi bao zeng shi 、qian yi he fen hua deng guo cheng 。ben yan jiu yi nai shan yang ru xian shang pi yuan dai xi bao wei shi yan cai liao ,guo biao da EGFRji yin bing jian ce dui xi bao zeng shi huo xing de ying xiang ;tian jia EGFyi ji EGFRxin hao tong lu xiang guan dan bai de yi zhi ji ,jian ce EGFRdui xi bao zeng shi de ying xiang 、tong shi jian ce Aktyi ji ERK1/2xin hao tong lu de ji huo qing kuang yi ji xi bao zhou ji dan bai de bian hua 。huo de de zhu yao yan jiu cheng guo ru xia :（1）tong guo dui nai shan yang ru xian shang pi yuan dai xi bao zhong jin hang bu tong nong du de EGF（0,12.5,25,50,100 ng/ml）chu li ,de dao kuo yi ru xian shang pi xi bao zhong sheng chang de nong du ,jie guo xian shi 12.550 ng/mL EGFke yi cu jin ru xian shang pi xi bao de zeng shi 。shi yong bu tong nong du AG1478chu li nai shan yang ru xian shang pi xi bao ,10μmol/Lde AG1478ke yi xian zhe jiang di xi bao zeng shi huo xing 。cheng gong de jiang pcDNA3.1-EGFRzhen he biao da zai ti zhuai ran yu shan yang yuan dai ru xian shang pi xi bao ,RT-qPCRjie guo xian shi EGFRji yin de mRNAshui ping shang diao 25bei yi shang ;WBjie guo xian shi ,guo biao da EGFRji yin yu EGF（50 ng/mL）gong tong chu li hou ,EGFRdan bai de lin suan hua shui ping xian zhe zeng jia （P<0.01）。Hoechst/PIran se jie guo biao ming ,dui guo biao da EGFRde shan yang ru xian shang pi xi bao jin hang EGFchu li hou ,xi bao shu liang ming xian zeng jia ;AG1478（10μmol/L）chu li shi xi bao shu mu ming xian jian shao ,xi bao cun huo neng li ming xian jiang di （P<0.01）。liu shi xi bao yi jian ce fa xian ,EGF（50ng/mL）zeng jia le Sji yu G2ji de xi bao bi li ,AG1478shi xi bao zhou ji zu zhi zai G1ji ,shui ming EGFdui xi bao zhou ji de cu jin zuo yong yu EGFRhuo hua guan ji mi qie 。（2）xie qing ji e 16 hhou ,EGF（50 ng/mL）ci ji ru xian shang pi xi bao ,EGFRlin suan hua shui ping sui EGFchu li shi jian yan chang er xian zhe zeng jia ,ERK1/2he AKTlin suan hua ming xian shang sheng 。EGFRyi zhi ji AG1478（10μmol/L）chu li ru xian shang pi xi bao 1 hhou ,EGF（50 ng/mL）jie dao de AKT、ERK1/2de lin suan hua shui ping dou xian zhe jiang di 。shan yang ru xian shang pi xi bao zhong tian jia 10μmol/L AG1478huo 10μmol/L Gefitinib 24 hhou fa xian ,P21dan bai shui ping ming xian shang sheng ,xi bao zhou ji dan bai Cyclin E1yi ji zhou ji dan bai ji mei CDK2dan bai shui ping xian zhe xia jiang 。EGFchu li ru xian shang pi xi bao hou zhou ji dan bai ji mei CDK2biao da ming xian zeng jia ;yu EGFzu xiang bi ,500 nmol/ml MK2206ji 1μmol/ml U0126chu li ru xian shang pi xi bao 24 hhou ,CDK2biao da jiang di ,shui ming EGFRtong guo xia you AKTyi ji ERK1/2xin hao dan bai ke diao kong CDK2de biao da 。zeng shang suo shu ,ben shi yan chu bu yan jiu le EGFRxin hao tong lu zai nai shan yang ru xian shang pi xi bao zhong de zuo yong 。tong guo tian jia EGFyi ji EGFRyi zhi ji ,zheng ming le EGFRdui nai shan yang ru xian shang pi xi bao zeng shi ju you cu jin zuo yong ,ERK1/2he AKTxin hao tong lu ke xian zhe diao kong CDK2ji mei de biao da ,wei ming que EGFRxin hao tong lu zai nai shan yang ru xian fa yo zhong de zuo yong di gong le li lun yi ju 。

论文参考文献

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