论文摘要
临床工作中，应用电刺激治疗难愈性创面，多以电流强度为主要调节参数。临床研究证实，电刺激能够加速创面的愈合。在创面愈合过程中，细胞的迁移和增殖是创面再上皮化的两个重要的方面。近年来，细胞在电场中迁移的有关研究较多，而用电流强度作为参数，观察电流直接作用下，细胞增殖情况的研究较少。为进一步探索电刺激加速创面愈合的机制，需建立以电流强度为参数的电刺激细胞培养模型。在此基础上，观测电流对细胞增殖情况的影响，探讨其作用机制，以期更好的指导临床实践。 目的： 1．在比较不同种类电极优缺点的基础上，完善电流刺激细胞装置，通过对角质形成细胞的电刺激培养，观测电刺激对细胞周期变化的影响，建立稳定的微电流刺激细胞体外培养的模型。2．HaCaT细胞与角质形成细胞性质相似，而且具有来源丰富，遗传稳定的特点。观测同一电流强度下，电刺激效应与培养时间的关系，观测不同时间对细胞增殖的影响，研究其时效关系；再者，研究不同电流强度对细胞增殖生长的量效关系。 方法： 1．按照实验要求，制作微电流发生器。2．直接加电，比较镍铬合金丝电极和纯铂金丝电极的优缺点，制作培养小室。3．对人原代角质形成细胞进行电刺激培养，检测细胞周期的变化，建立微电流刺激细胞生长的体外培养模型。4．在此模型基础上，用MTT比色法检测不同培养时间电刺激（10μ A，5分钟／次，2次／天）对HaCaT细胞的增殖效应，找出最大效应出现的培养时间。在相应时间点上，再进行了细胞周期测定和PCNA免疫组化染色。5．在最大效应的时间点，通过MTT比色法，检测10μ A，5分钟／次，2次／天；50μ A，5分钟／次，2次／天；250μ A，5分钟／次，2次／天三种电刺激参数组合条件下对HaCaT细胞株增殖反应的影响。 结果： 1．制成微电流发生器，输出电流强度在4μA-1800μ A范围内可调。经长时间电刺激观察，纯铂金丝电极小室，电极上未见电化学反应产物。 2．10μ A，5分钟／次，2次／天的电刺激4天使人原代角质形成细胞在G0／G1期的百
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