论文摘要
从红豆杉中提取得到的紫杉醇（Taxol）是一种新型抗癌药物。由于资源缺乏,致使其价格昂贵,红豆杉也因此被人们誉为“黄金树”。红豆杉与真菌共生,生长缓慢,种子后熟期长,这给大规模繁殖、栽植造成了一定的困难。目前以大田植株组织或器官为材料,植株再生研究较少,尚无诱导不定胚等的报道。本文以南方红豆杉和曼地亚红豆杉为供试材料,对红豆杉外植体的灭菌、愈伤组织的诱导及其分化、腋芽增殖再生植株体系及根的离体培养、蛋白质分析、PPO和POD酶同工酶的分析等方面进行了较系统的研究。结论如下:1.通过对不同灭菌剂、灭菌方法、灭菌时间、生长年龄及取材部位的外植体材料灭菌研究,使用75%酒精浸泡15 S左右后,0.2%升汞5+5 min的二次灭菌为最适灭菌方案。2.处于生长活跃期,树冠上部或当年生枝条的腋芽、具叶茎段是愈伤组织诱导的最适材料。B5+NAA 1.0 mg/L+IBA 1.0 mg/L+BA 0.1 mg/L+GA3 1.0 mg/L是南方红豆杉和曼地亚红豆杉愈伤组织诱导较适的培养基;GA3对愈伤组织的增殖及抑制其褐化具有一定的作用。南方红豆杉的愈伤组织在B5+IBA 0.2 mg/L+BA 0.1 mg/L培养基上培养,获得了假胚珠。3.1个茎段外植体上可萌发多个腋芽,木质化程度高的外植体,形态学最上端的腋芽先萌动,木质化程度较低的,形态学最下端的腋芽先萌动。南方红豆杉腋芽萌动的较适培养基是DCR+IBA 0.1 mg/L+BA 0.05 mg/L,萌动率达97.5%,曼地亚红豆杉较适培养基为DCR+NAA 0.5 mg/L+BA 0.05 mg/L,萌动率达84.9%。4.1/2 DCR+IBA 0.5 mg/L+NAA 0.2 mg/L是南方红豆杉的较适生根培养基,曼地亚红豆杉的较适生根培养基为1/2 DCR+IBA 0.2 mg/L+NAA 0.5 mg/L。5.南方红豆杉和曼地亚红豆杉的小苗扦插至黄泥:细沙=2:1的土壤中,在温度25℃,75%以上湿度下,成活率分别为90.1%、87.5%;解决了红豆杉试管苗难于生根的问题。6.南方红豆杉根离体培养的较适培养基为改良White+IBA 0.2 mg/L,曼地亚红豆杉为改良White+IBA 0.5 mg/L。7.大田栽植的南方红豆杉和曼地亚红豆杉的蛋白质及PPO、POD同工酶谱带存在明显的差异。随着生长发育进行,蛋白质及PPO同工酶的谱带条数呈少-多-少的规律变化。南方红豆杉茎外植体诱导的愈伤组织在衰老的过程中,蛋白质、POD同工酶谱带条数减少:PPO同工酶的谱带条数增加,愈伤组织在培养过程中出现褐化与其基本呈正相关。