辛硫磷在鲫鱼体内分布及对鱼体AChE活性的影响

论文摘要

辛硫磷是一种常用的有机磷农药,在我国被广泛用于农业生产中,在水产养殖业也被用作渔药。施于农田的辛硫磷会随水体迁移进入江河中,继而在水生生物体内蓄积。用作渔药的辛硫磷也会对水生生物的安全性造成影响。当水体中辛硫磷浓度较高时会对鱼体产生毒性作用,其毒性作用主要是由于鱼体的乙酰胆碱酯酶受到抑制引起的。当辛硫磷浓度较低时,虽然鱼体不会出现明显的中毒症状,但辛硫磷会在鱼体内蓄积,并通过生物链和生物富集作用对人体的健康造成危害。因此,有必要对鱼体的辛硫磷残留量进行检测和监控,以保障水产品的安全。主要研究内容和结果分述如下：1鲫鱼组织中辛硫磷残留量的测定采用基质固相分散-高效液相色谱法对鲫鱼组织中的辛硫磷残留进行测定。称取0.1 g的鲫鱼组织,加入0.5 g无水硫酸钠和1.5 g弗罗里硅土,于研钵中研磨均匀后转入针筒注射器中,用8 mL二氯甲烷进行洗脱,洗脱液浓缩后加入1 mL甲醇溶解,HPLC分析。液相色谱条件为：C18色谱柱,流动相为甲醇+水（75+25,v/v）,流速1.2mL/min,检测波长为280 nm,柱温恒定在40℃。辛硫磷在0.0105-5.25 mg/L线性关系良好,回归方程为y=（30999.3±326.4）x+（158.8±785.5）,R2=0.9996。在0.0525mg/kg和0.21 mg/kg的加标水平下,各组织中辛硫磷的回收率分别为87.4%-95.8%和86.2%-103.6%,相对标准偏差均小于15%。辛硫磷在肝、肉、脑、鳃四个组织中的检测限均为0.02 mg/kg。所建立的方法精确可靠,可用于鲫鱼组织中辛硫磷残留量的测定。2辛硫磷对鲫鱼的急性毒性实验采用静态染毒法进行急性毒性试验。染毒周期为96 h。每24 h更换试验溶液。96 h内鲫鱼全部死亡的最低浓度为6.6 mg/L,高浓度组和低浓度组鲫鱼出现明显的中毒症状。采用PASW软件对毒性数据进行处理,得到辛硫磷对鲫鱼的96 h LC5o为3.110 mg/L,安全浓度为0.311 mg/L,并据此判断辛硫磷对鲫鱼属于中毒农药。3辛硫磷对AChE活性的影响辛硫磷对鲫鱼脑部和肌肉AChE活性具有明显的抑制作用。当染毒浓度分别为0.1 mg/L和0.5 mg/L时,辛硫磷对鲫鱼脑部和肌肉AChE抑制作用分别在24 h和48h时达到最大,此后酶活会有缓慢的恢复,但恢复后的酶活同对照组相比仍极显著性降低（P<0.01）。4辛硫磷在鲫鱼体内的分布染毒实验开始后,辛硫磷被鲫鱼组织吸收并开始富集,各组织中辛硫磷残留量均在144 h以后达到最大值。肝、脑、鳃组织富集作用明显,而肌肉组织中富集作用最小,最大生物富集因子为39.8 L/kg。表明鲫鱼可食部位肌肉不易于蓄积有机磷农药辛硫磷,对于鲫鱼的食用安全性是有利的。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 缩略语表
• 第一章 前言
• 1 有机磷农药简介
• 1.1 有机磷农药发展简史
• 1.2 有机磷农药产业及其作用
• 1.3 有机磷致毒机理
• 1.3.1 胆碱酯酶的功能
• 1.3.2 有机磷抑制AChE机理
• 2 辛硫磷的提取及检测方法
• 2.1. 辛硫磷简介
• 2.2 辛硫磷的提取方法
• 2.2.1 液液萃取（LLE）
• 2.2.2 固相萃取（SPE）
• 2.2.3 液相微萃取（LPME）
• 2.2.4 基质固相分散（MSPD）
• 2.3 辛硫磷的检测方法
• 2.3.1 薄层层析色谱法（TLC）
• 2.3.2 气相色谱-火焰光度检测器法（GC-FPD）
• 2.3.3 高效液相色谱法（HPLC）
• 2.3.4 质谱法（MS）或串联质谱法（MS-MS）
• 2.3.5 其他检测方法
• 2.3.5.1 极谱法
• 2.3.5.2 酶抑制法（EI）
• 2.3.5.3 薄层层析-酶抑制法（TLC-EI）
• 2.3.5.4 荧光法
• 2.3.5.5 化学发光法
• 3 辛硫磷在植物体内的残留
• 4 基质固相分散（MSPD）
• 4.1 MSPD操作流程
• 4.2 MSPD影响因素
• 4.2.1 填料
• 4.2.2 样品与填料比
• 4.2.3 洗脱溶剂
• 4.2.4 洗脱体积
• 4.2.5 样品基质
• 4.3 MSPD的优点
• 4.3.1 分析速度快
• 4.3.2 溶剂用量少
• 4.3.3 分离效果好
• 4.3.4 易于自动化和微型化
• 5 急性毒性实验
• 5.1 试验用鱼的选择
• 5.2 急性毒性试验的毒性参数
• 100或LC₁₀₀)'>5.2.1 绝对致死量或绝对致死浓度(LD₁₀₀或LC₁₀₀)
• 50或LC₅₀)'>5.2.2 半数致死量或半数致死浓度(LD₅₀或LC₅₀)
• 01)'>5.2.3 最小致死量(MLD或LD₀₁)
• 5.2.4 最高无害作用剂量（NOAEL）
• 5.2.5 安全浓度
• 5.3 急性毒性试验的目的
• 6 本课题研究的主要内容
• 第二章 鲫鱼组织中辛硫磷残留量测定的MSPD-HPLC法
• 引言
• 1 材料与方法
• 1.1 主要试剂和仪器
• 1.1.1 主要试剂
• 1.1.2 主要实验仪器
• 1.2 实验方法
• 1.2.1 辛硫磷标准溶液的配制
• 1.2.1.1 辛硫磷储备液的配制
• 1.2.1.2 辛硫磷工作溶液的配制
• 1.2.2 MSPD处理过程
• 1.2.3 HPLC色谱条件
• 2 结果与分析
• 2.1 MSPD条件优化
• 2.1.1 吸附剂和洗脱剂的选择
• 2.1.2 洗脱体积的选择
• 2.2 HPLC色谱条件的优化
• 2.2.1 检测波长的选择
• 2.2.2 流动相的选择
• 2.2.3 流速的选择
• 2.2.4 柱温和进样量的选择
• 2.3 方法验证
• 2.3.1 线性
• 2.3.1.1 外标法标准曲线
• 2.3.1.2 基质标准工作曲线
• 2.3.2 回收率、精密度
• 2.3.3 检测限
• 2.4 实际样品的测定
• 3 小结与讨论
• 第三章 辛硫磷对鲫鱼的急性毒性实验
• 1 材料与方法
• 1.1 实验材料与试剂
• 1.2 溶液配制
• 1.2.1 辛硫磷原药储备液的配制
• 1.2.2 辛硫磷试验溶液的配制
• 1.3 实验动物
• 1.4 试验方法
• 1.4.1 预试验
• 1.4.2 正式试验
• 1.5 数据处理
• 2 结果与分析
• 2.1 预试验试验结果
• 2.2 正式试验结果
• 2.2.1 鲫鱼急性中毒症状
• 50,安全浓度及毒性分级'>2.2.2 辛硫磷对鲫鱼的LC₅₀,安全浓度及毒性分级
• 3 小结与讨论
• 第四章 辛硫磷对鲫鱼AChE活性的诱导规律研究
• 引言
• 1 材料与方法
• 1.1 主要试剂和仪器
• 1.1.1 主要试剂
• 1.1.2 主要仪器和设备
• 1.2 实验动物
• 1.3 溶液的配制
• 1.4 染毒实验
• 1.5 酶液的提取
• 1.6 蛋白含量的测定
• 1.7 酶活的测定
• 2 结果与分析
• 2.1 组织的选取
• 2.2 相同浓度辛硫磷对不同组织酶活性的影响
• 2.3 不同染毒浓度对同一组织酶活性的影响
• 3 小结与讨论
• 第五章 辛硫磷在鲫鱼体内的富集分布
• 引言
• 1 材料与方法
• 1.1 实验动物
• 1.2 仪器和试剂
• 1.2.1 主要试剂
• 1.2.2 主要仪器和设备
• 1.3 染毒实验
• 1.4 辛硫磷残留量的测定
• 2 结果与分析
• 2.1 辛硫磷在鲫鱼不同组织中的富集作用
• 2.1.1 辛硫磷在鲫鱼肝中的富集
• 2.1.2 辛硫磷在鲫鱼肌肉中的富集
• 2.1.3 辛硫磷在鲫鱼脑中的富集
• 2.1.4 辛硫磷在鲫鱼鳃中的富集
• 2.2 辛硫磷在鲫鱼体内的分布
• 3 小结与讨论
• 参考文献
• 致谢
• 附录 攻读硕士学位期间成果目录