PELA为载体的GST缓释疫苗微球的制备工艺研究

论文摘要

谷胱甘肽S-转移酶（Glutathione S-transferase,GST）是目前国际上公认的血吸虫疫苗的主要侯选蛋白之一,通过基因工程技术对GST蛋白进行克隆和表达,可解决以往疫苗筛选所涉及的虫源困难问题,并可保证疫苗的安全性。由于GST疫苗在体内易快速降解和消除,且单独使用免疫效果欠佳等缺陷,大大影响了疫苗的临床应用。生物可降解聚合物微球是一种具有佐剂效应的疫苗缓控释系统,它可以提供大量抗原并防止其在生理条件下的快速降解,通过微球对所包埋抗原的持续或脉冲释放行为,有效模拟传统疫苗的多次免疫过程,可以在相当长时间内持续提供抗原,从而减少接种次数和免疫原的使用总量,增强病人的适应性,降低用药成本。本论文围绕生物可降解微球载体的制备工艺、体外质量评价以及缓释疫苗微球的制备和评价开展了一系列的研究工作,论文共分为以下四个部分: 第一部分综述对目前生物技术药物,特别是蛋白多肽类和疫苗类药物的缓释微球的研究进展进行了综述,主要包括制备微球常用的载体材料、常用的制备方法、缓释微球的体外释放特征、缓释微球的稳定性研究等几个方面的内容;概述了目前国内外缓释疫苗微球给药系统的发展趋势,为论文后续实验工作的开展奠定基础。第二部分 PELA微球载体的制备以乙酸乙酯为有机溶剂,牛血清白蛋白（Bovine serum albumin,BSA）为模型药物,采用复乳溶媒挥发法制备了聚乳酸-聚乙二醇共聚物（Poly-D,L-lactide-co-poly（ethylene glycol）,PELA）微球。以微球的包封率和载药量为指标,考察了有机溶剂种类、载体材料、稳定剂类型、聚乙烯醇（Polyvinyl alcohol,PVA）浓度以及内相水油比例等因素对微球制备的影响,同时考察了各处方所得微球的形态。在单因素试验的基础上,选取对微球制备影响较大的3个因素:药载比、PELA浓度、PVA体积进行正交试验,确定优化处方。最后确定的处方工艺是:乙酸乙酯为有机溶剂:PELA为载体材料,其浓度为50mg·mL-1;2%PVA为外水相稳定剂,其体积为20mL;内相水油比为1:10;药载比为1:5。

论文目录

引言

第一部分综述

第二部分 PELA微球载体的制备

1. 仪器与试剂

1.1 仪器

1.2 药品和试剂

2. 实验方法

2.1 微球的制备

2.2 制备工艺的优化

2.2.1 单因素试验

2.2.2 正交设计优化工艺

3. 实验结果

3.1 单因素试验结果

3.1.1 各因素对微球形态的影响

3.1.2 各因素对微球载药量和包封率的影响

3.2 正交设计试验结果

4. 讨论

4.1 单因素试验

4.1.1 有机溶剂的选择

4.1.2 载体材料的选择

4.1.3 稳定剂的选择

4.1.4 PVA浓度的选择

4.1.5 内相水油比例的选择

4.2 正交设计试验

5. 小结

第三部分 PELA微球载体的体外质量评价

1. 仪器与试剂

1.1 仪器

1.2 药品和试剂

2. PELA微球的形态和粒径考察

3. PELA微球载药量和包封率的测定

3.1 微球消解方法与条件的选择

3.1.1 消解方法的选择

3.1.2 消解液的选择

3.2 紫外-可见分光光度法的建立

3.2.1 检测波长的确定

3.2.2 线性范围的考察

3.2.3 回收率试验

3.2.4 精密度试验

3.3 载药量和包封率的测定

4. PELA微球的体外释药性质研究

4.1 测定方法的建立

4.1.1 测定方法的选择

4.1.2 线性范围考察

4.1.3 回收率试验

4.2 PELA微球的体外释放

5. 讨论

5.1 微球载药量和包封率的测定

5.2 影响微球中药物突释的因素

6. 小结

第四部分缓释疫苗微球的制备及其质量评价

1. 仪器与试药

1.1 仪器

1.2 药品和试剂

2. 实验内容

2.1 疫苗微球的制备

2.2 疫苗微球的形态、粒径大小及其分布

2.3 疫苗微球的载药量和包封率测定

2.3.1 标准曲线的绘制

2.3.2 回收率试验

2.3.3 精密度试验

2.3.4 疫苗微球载药量和包封率的测定

2.4 疫苗微球中蛋白质结构的完整性分析

2.4.1 聚丙烯酰胺凝胶电泳测定原理

2.4.2 实验方法

2.4.3 实验结果

2.5 疫苗微球体外释药特性的初步研究

2.6 微球中溶剂残留测定

2.6.1 色谱条件

2.6.2 溶液的配制

2.6.3 样品的测定

3. 讨论

4. 小结

结论

参考文献

致谢

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