WAVE1在K562白血病细胞侵袭中的作用及机制研究

论文摘要

WASP家族富含脯氨酸同源蛋白1（WASP-family verprolinhomologous protein 1,WAVE1）为近年来发现的新型肌动蛋白调节蛋白,在肌动蛋白聚合和细胞骨架重排中发挥重要作用。近年研究发现WAVE1在人类血液系统肿瘤细胞株中高表达。我们前期研究中发现WAVE1在儿童急性白血病患儿骨髓单个核细胞中高表达,并且与白血病病程相关,但其参与白血病致病的机制尚不清楚。已有研究发现了WAVE蛋白家族参与了实体肿瘤细胞的侵袭转移,但WAVE1是否参与与白血病细胞侵袭转移尚不清楚。本研究首先利用包含84个重要肿瘤通路基因的SuperArray PCR基因芯片研究了转染pcDNA3.1-WAVE1质粒后高表达WAVE1的白血病K562细胞系,发现转染后基质金属蛋白酶2（MMP-2）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）、整合素β3（Integrin,beta 3）等与肿瘤细胞侵袭转移的相关基因表达明显上调。提示WAVE1可能参与了肿瘤侵袭转移。接着以表达上调最明显的MMP-2为研究对象发现:转染pcDNA3.1-WAVE1 24h及48h后K562细胞MMP-2 mRNA和蛋白表达水平明显上调,而转染WAVE1 siRNA 24h及48h后K562细胞MMP-2 mRNA及蛋白水平明显下调。说明WAVE1可能参与了MMP-2表达的调控。进一步研究发现WAVE1促进了K562细胞丝裂原激活的的蛋白激酶（MAPK）通路的细胞外信号调节激酶（ERK1/2）的磷酸化,WAVE1可能通过这一途径影响MMP-2的表达。通过免疫荧光技术发现WAVE1与MMP-2在K562细胞的细胞膜上存在共定位。最后利用transwell方法检测了WAVE1表达对K562细胞侵袭能力的影响,发现与对照组K562细胞相比转染pcDNA3.1-WAVE1后细胞侵袭能力增强,而转染WAVE1 siRNA干扰WAVE1表达后K562细胞侵袭能力减弱。综上,本研究证明了WAVE1参与了K562白血病细胞侵袭的过程,其机制可能和调控MMP-2的表达并与MMP-2协同作用促进了白血病细胞的侵袭转移有关。WAVE1可以作为抗白血病细胞侵袭的新靶点。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 目录
• 英文缩写注释
• 前言
• 第一章 WAVE1基因高表达对K562细胞肿瘤通路基因表达的影响
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 2 结果
• 2.1 RNA纯度检测结果
• 2.2 琼脂糖凝胶电泳
• 2.3 Real-timePCR基因芯片扩增
• 2.4 差异基因结果综合分析
• 3 讨论
• 4 小结
• 参考文献
• 第二章 WAVE1对白血病K562细胞系MMP-2表达的影响
• 1 材料和方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 2 结果
• 2.1 Real-time PCR结果
• 2.2 Western blot检测蛋白水平MMP-2的变化
• 2.3 ELISA结果
• 2.4 WAVE1对K562细胞ERK磷酸化的影响
• 3 讨论
• 4 小结
• 参考文献
• 第三章 WAVE1对K562细胞系侵袭能力的影响
• Transwell侵袭实验简介
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 2 结果
• 2.1 免疫荧光
• 2.2 Transwell结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 参考文献
• 总结论
• 综述 基质金属蛋白酶（MMP）与恶性肿瘤关系的研究进展
• 致谢
• 攻读学位期间发表论文