论文题目: 人骨形态发生蛋白-2真核表达质粒的制备、转染及表达
论文类型: 硕士论文
论文专业: 外科学
作者: 康春雨
导师: 章庆国
关键词: 骨形态发生蛋白,真核表达质粒,骨髓基质细胞,基因转染
文献来源: 东南大学
发表年度: 2005
论文摘要: 目的:探讨BMP-2转染骨髓基质细胞的最佳转染条件和方法,制备含人骨形态发生蛋白-2(hBMP-2)基因的真核表达质粒,将其转染到兔骨髓基质细胞中使之稳定表达hBMP-2。获得可稳定高效表达骨形态发生蛋白的骨髓基质细胞,为最终临床应用奠定实验基础,同时也为探索组织工程化骨的构建方法提供新思路。方法:实验分2组,A组:空白组(未做基因转染);B组:实验组(转染BMP-2基因组)。1、逆转录聚合酶链反应扩增出hBMP-2目的DNA片段。通过连接酶连入真核质粒pcDNA3.1中,经大肠杆菌JM109.2扩增和筛选,构建出重组真核质粒pcDNA3.1 -hBMP-2。2、通过脂质体法将所得到的重组真核质粒转染到兔骨髓基质细胞中,用G418进行梯度筛选,从而获得能够稳定表达hBMP-2的细胞克隆。3、采用逆转录酶链反应(RT-PCR )检测培养MSCs中hBMP-2 mRNA的表达。结果:1、重组质粒通过EcoRI酶切后,电泳图示约1.5kb的hBMP-2的目的片段及5.5kb的载体片段,证明重组质粒连接正确。2、经RT-PCR检测hBMP-2在转录水平mRNA的表达情况,提示转染组hBMP-2的功能片段mRNA量较空白对照组明显增加。经MTT法检测显示转染后的骨髓基质细胞生长速度较快。结论:成功制备了含hBMP-2基因的真核表达质粒。转染后获得了高效表达hBMP-2的兔骨髓基质细胞。
论文目录:
中文摘要
Abstract
一 前言
二 文献综述
三 实验内容
第一部分 骨形态发生蛋白－2 重组真核表达质粒的制备
第二部分 骨形态发生蛋白－2 重组质粒的转染及表达
四 讨论
五 结论
六 参考文献
七 作者简介
致谢
附录（发表综述)
发布时间: 2007-06-11
参考文献
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