人外周血内皮前体细胞的体外诱导与培养

论文摘要

胚胎发生时期,内皮前体细胞（endothelial progenitor cells EPCs）参与了原始血管形成的最初过程（血管发生）。已有的证据显示,发育为内皮细胞（endothelial cells ECs）的前体也存在于成人中,正常情况下,EPCs停留在成人的骨髓,但是,可以通过细胞因子或血管生成因子信号被动员到循环血,迁移到生理或病理条件下的新血管形成位点,并原位分化成内皮细胞,有助于血管新生（成人的血管发生）。目前,出生后血管发生的研究是临床研究的热点问题,自源的EPCs原位动员或移植是治疗性血管再生的一个潜在、有效的方法,而且,内皮前体也代表了阻止肿瘤生长的一个潜在的靶位。因此,要达到真正的临床应用,首选的问题之一就是探索EPCs的分离、培养与鉴定。 本论文旨在探讨人外周血EPCs的分离、体外诱导与分化,以及培养与鉴定,并研究其体外的生物学活性,为血管生成的细胞治疗提供参考依据。 Ficoll液作为单个核细胞的提取液,用新鲜、抗凝的全血和抗凝血静置后取富集单个核细胞层这两种方法提取单个核细胞,分离的细胞浓度调整为1.0×106个/ml,接种在24孔培养板上,培养液分别用含有促血管生长因子VEGF、bFGF、IGF、EGF等的内皮生长基质EGM-2和不含血管生长因子的内皮基础培养液EBM,第4d移走非黏附细胞,继续培养黏附细胞,黏附细胞与Dil-AC-LDL和FITC标记的UEA-1一起孵育,荧光显微镜和激光扫描共聚焦显微镜下观察。第7d,收集黏附细胞,流式细胞仪检测其表面标志CD34、CD31、CD45、KDR的表达。 结果显示,用抗凝血静置后取富集单个核细胞层的方法提取单个核细胞,既缩短时间又排除了过多红细胞的干扰。Dil-AC-LDL和FITC标记的UEA-1双阳性的细胞在荧光显微镜和共聚焦显微镜下都能看到。细胞培养7d后,FACS分析,CD34+、CD31+、KDR+的表达分别为2.79%、6.27%、31.24%,而CD45表达呈阴性。 由此得出结论:外周血中确实存在EPCs,并且在血管生长因子VEGF、bFGF、IGF、EGF等的刺激下能分化为成熟的Ecs。

论文目录

• 符号说明
• 中文摘要
• 英文摘要
• 第一部分：文献综述
• 第二部分：学位论文 人外周血内皮前体细胞的体外诱导与培养
• 1. 前言
• 2. 材料与方法
• 3. 结果
• 4. 讨论
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间发表的论文