Myostatin自体疫苗的研究

论文摘要

Myostatin（Mstn或Ms）属于TGF-β超家族新成员，主要在骨骼肌中表达。Myostatin是骨骼肌生长发育的负调控因子，抑制myostatin的功能可明显提高骨骼肌质量。基因敲除myostatin的小鼠肌纤维有明显的增生和增粗，脂肪含量随年龄的增长而明显降低。抑制myostatin活性的蛋白如其前肽、follistatin蛋白、Act RⅡB非活性结构域蛋白高表达的转基因小鼠体重和骨骼肌质量明显提高。Myostatin蛋白酶切加工位点突变的转基因小鼠，同样显示小鼠体重增加。而抗myostatin单克隆抗体处理的杜氏肌营养不良模型小鼠（DMD），骨骼肌质量和力量明显增加，患病的小鼠症状明显改善，证实了myostatin作为骨骼肌生成负调节因子对成年动物也有作用，并为myostatin单克隆抗体用于临床骨骼肌发育抑制性疾病的治疗提供了依据。 虽然针对myostatin蛋白的单克隆抗体在治疗肌肉相关疾病的过程中显示出了良好的效果，但是，造价的昂贵和使用上的不便限制了单克隆抗体的广泛应用，因此，由被动地接受这种抗体蛋白转向寻求针对该蛋白的主动免疫疫苗有更好的应用前景。本课题拟构建能够诱导出针对myostatin特异性中和抗体的治疗性疫

论文目录

• 缩略语表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言和文献回顾
• 正文
• 实验材料
• 第一部分 基因克隆、表达及实验室规模纯化
• 1 实验方法
• 1.1 寡核苷酸的合成
• 1.2 感受态细胞的制备
• 1.3 基因克隆及载体构建
• 1.4 重组蛋白的诱导表达、纯化与鉴定
• 1.5 工程菌的培养
• 1.6 重组质粒的扩增和纯化
• 1.7 重组质粒的真核表达及检测
• 2 实验结果
• 2.1 重组质粒pQE-Ms和pQE-TT-Ms的构建
• 2.2 免疫小鼠肌肉和脂肪组织重量变化
• 2.3 重组蛋白的诱导表达、纯化与复性
• 2.4 重组质粒pVAC-TT-Ms的纯化与真核表达
• 3 讨论
• 第二部分 动物免疫试验
• 1 材料和方法
• 1.1 实验动物
• 1.2 小鼠免疫方法
• 1.3 ELISA测定血清抗体滴度
• 1.4 血清常规指标测定方法
• 1.5 骨骼肌形态分析方法
• 1.6 握力测试方法
• 1.7 数据统计学处理
• 2 实验结果
• 2.1 免疫小鼠体重变化
• 2.2 免疫小鼠肌肉和脂肪组织重量变化
• 2.3 免疫小鼠肌肉组织形态变化
• 2.4 小鼠前肢握力测试
• 2.5 免疫小鼠抗血清的检测
• 2.6 免疫小鼠血清指标的检测
• 3 讨论
• 小结
• 参考文献
• 个人简历和研究成果
• 致谢