非T细胞结合肽的分离、分析

论文摘要

多肽类化合物是一类重要的生物活性分子目前在生命科学领域有广泛应用,全球已有50多种肽类药物上市,如：人胰岛素、人生长激素、干扰素、白介素等。临床主要用于抗肿瘤,刺激造血；补充和替代治疗。研究表明,T淋巴细胞被激活,会导致细胞因子的释放、免疫球蛋白、趋化因子及自由基等炎症介质增多,进而引起滑膜增生,软骨及骨破坏等慢性致残性病理变化。非T细胞结合肽及其粉针是针对该病自主研发的创新药物。与传统药物相比,非T细胞结合肽可以针对该病的发病原因,通过抑制免疫反应的起始环节,从发病中心环节遏制本病的发生和发展。因此,建立非T细胞结合肽的分离分析方法,科学严密的表征、评价,以达到控制药物中的杂质,确保药物纯度,保证此类生物技术药物的安全有效和质量可控的目的具有重要意义。本论文分为以下四部分：（1）综述部分,对非T细胞结合肽的应用前景,药物中杂质的来源、目标肽与杂质肽的关系、及其分离分析方法研究新进展进行了综述。（2）合成非T细胞结合肽的理化性质、结构确证研究。对合成多肽进行了性状、理化性质、氨基酸组成分析等研究,为说明多肽结构提供辅助信息,还采用液-质联用、氨基酸测序技术对合成多肽进行结构确证。（3）考察了不同机理分析方法对非T细胞结合肽的分离效果,建立了反相色谱法测定非T细胞结合肽含量的方法,并进行方法学验证。结果表明所建立的方法杂质与主成分分离度较好,具有良好的准确度、精密度和线性,采用外标法测定了样品中的目标肽含量。建立了超高压液相色谱法分离非T细胞结合肽及其杂质的方法,并对合成过程中杂质进行分离。初步考察了非T细胞结合肽稳定性的影响因素,分析了样品适当的储存条件。（4）对非T细胞结合肽中杂质进行了研究。采用反相制备液相色谱分离了杂质混合物,通过选择合适的色谱条件,采用高效液相色谱法对收集的杂质进一步分离,结合相应文献和合成工艺对推断可能存在的杂质,并通过液-质联用技术初步确证了杂质的化学结构。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第1章 绪论
• 1.1 研究目的和意义
• 1.2 多肽药物质量研究的内容
• 1.2.1 多肽药物杂质的定义及来源
• 1.2.2 多肽杂质的分类
• 1.2.3 多肽杂质的形成和结构研究
• 1.3 国内外研究现状
• 1.4 多肽药物的分离与检查方法
• 1.4.1 产品的鉴定
• 1.4.2 纯度分析
• 1.4.3 生物活性测定
• 1.4.4 生物检定法
• 1.4.5 免疫学方法
• 1.4.6 放射性同位素标记法
• 1.4.7 电泳法
• 1.4.8 质谱检测
• 1.4.9 肽谱分析
• 1.4.10 色谱法
• 1.4.11 色谱-光谱联用技术
• 1.4.12 核磁共振检测法
• 第2章 非T细胞结合肽的质量研究
• 2.1 仪器与试剂
• 2.1.1 仪器
• 2.1.2 试剂
• 2.2 性状
• 2.2.1 外观性状
• 2.2.2 溶解性
• 2.2.3 熔点
• 2.2.4 比旋度
• 2.2.5 等电点（pI）
• 2.2.6 分子量
• 2.3 鉴别:结构确证
• 2.3.1 元素分析
• 2.3.2 氨基酸组成分析
• 2.3.3 氨基酸序列测定
• 2.3.4 圆二色谱图谱
• 2.3.5 质谱
• 2.3.6 核磁共振谱
• 2.4 检查
• 2.4.1 水份
• 2.4.2 反离子测定
• 2.4.3 肽含量测定
• 2.4.4 有机溶剂残留的测定
• 2.5 本章小结
• 第3章 非T细胞结合肽有关物质检查方法的研究
• 3.1 仪器与试药
• 3.1.1 仪器
• 3.1.2 试药
• 3.2 分离方法摸索
• 3.2.1 HPLC法
• 3.2.2 CE法
• 3.2.3 离子交换色谱（IEC）
• 3.2.4 离子对色谱法
• 3.2.5 分子排阻法
• 3.2.6 超高效液相色谱法
• 3.3 杂质研究
• 3.3.1 杂质的制备、富集
• 3.3.1.1 实验方法
• 3.3.1.2 杂质分离富集方法
• 3.3.1.3 实验结果
• 3.4 杂质的液质结构确证
• 3.4.1 实验方法
• 3.4.2 结果与讨论
• 3.5 本章小结
• 结论
• 参考文献
• 攻读硕士学位期间所参与课题及发表的论文
• 致谢