脂肪干细胞移植对大鼠脑出血模型细胞凋亡的影响

论文摘要

干细胞是体内存在的一类具有可以自我更新,同时具有多向分化潜能的特殊细胞。随着近期组织工程和基因治疗技术的研究进展,寻找合适的种子细胞及细胞替代治疗已成为当前生命科学研究的热点,胚胎干细胞与神经干细胞的发现为神经修复开辟了一个有效途径,并且对中枢神经系统退行性疾病治疗采取的细胞替代治疗即细胞移植已取得疗效肯定。但是无论是胚胎干细胞还是神经干细胞都存在着取材来源少,耗材多,生长繁殖慢等缺点以及受法律、道德、伦理的限制,制约它们的发展及应用。骨髓基质细胞来源于中胚层间充质多能干细胞,具有自我复制及多向分化潜能。骨髓基质细胞移植研究日益深入,已应用于临床治疗心肌梗塞,并且移植到脑内可改善神经退行性疾病的神经功能。然而骨髓基质细胞获取时需通过麻醉后抽取骨髓或取肋骨,给病人带来痛苦,获取数量有限,培养时间长等问题限制其发展。脂肪组织与骨髓一样来源于中胚层,脂肪间充质干细胞量多且可以多向分化。脂肪组织可以自体抽取,来源丰富,可自体细胞移植,无免疫排斥反应,避免疾病传播,是干细胞生物工程研究的理想来源。目的:本实验应用酶消化法,对SD大鼠腹股沟脂肪组织间充质干细胞分离培养,ADSC大鼠脑内出血模型移植后进行神经功能测评,观察ADSC脑内移植后脑内血肿周围神经细胞凋亡的情况,探讨ADSC脑内移植对脑内血肿周围神经细胞凋亡的影响及机制。方法:脂肪干细胞培养、增殖、鉴别及诱导健康成年Sprague-Dawley（S-D）大鼠,过量麻醉处死,无菌条件下取腹股沟脂肪,用PBS反复冲洗,胶原酶消化脂肪组织进行ADSC分离培养。对ADSC在体外进行传代培养,观察其增殖能力。对培养的脂肪干细胞进行成脂诱导。脂肪干细胞的脑内移植:在立体定向仪定位下行SD大鼠右侧尾状核脑内血肿模型制作。Ⅱ-Ⅲ代ADSC在立体定向仪定位下行右侧脑室内移植。约106个细胞,细胞悬液约10ul。缓慢注入右侧脑室。脑出血模型ADSC脑内移植后神经功能测评比较采用longa等的5分评分法观察模型组、对照组、移植组3天、1周、2周、3周、4周神经功能测评。ADSC脑内移植后Tunel染色:将ADSC脑内移植3天、1周、2周、3周、4周后按时间点捕杀大鼠,灌注后取脑标本,送病理科制切片,行Tunel染色,观察脑出血灶周围凋亡细胞。结果:脂肪组织经胶原酶消化,接种细胞24小时后贴壁生长,原代培养7—10天,即达70—80%融合。2—4天细胞可再次传代。经过频繁换液、传代,细胞得以纯化。加入成脂诱导培养基诱导2—4天后培养液就出现含脂滴的细胞。对照组培养后未见脂肪细胞形成。大鼠脑出血模型内移植ADSC后神经功能改善明显,对照组模型组无差异,而移植组与模型组,移植组与PBS组间差异有统计学意义。大鼠脑出血模型脑内移植ADSC组脑出血周围凋亡细胞数小于模型组,从第3天开始随时间增加凋亡数越来越少。结论:1从S-D大鼠腹股沟脂肪组织中可分离、培养出ADSCs。ADSCs在10%FBS的低糖DMEM培养基中体外增殖。ADSCs经成脂诱导剂诱导分化为脂肪细胞。2、ADSC脑内移植能改善大鼠脑出血所致的神经功能缺损。3、ADSC脑内移植减少脑出血周围细胞凋亡。4、ADSC脑内移植神经功能可能是由于减少神经细胞凋亡而起到脑保护作用。

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