论文摘要
2005年5月至2006年12月间,我们用NCCLS推荐的ESBLs初筛、确证试验方法和AmpC酶氯唑西林双纸片法对从河南省各地分离出的20株临床菌及实验室保存菌种进行检测,用二倍稀释法及K-B纸片法检测临床分离菌的药物敏感性,并用PCR扩增、酶切鉴定、测序分析等分子生物学方法对ESBLs和AmpC酶阳性的10株临床分离菌进行了耐药基因的初步分型。试验结果表明,全自动微生物鉴定系统（VITEK-32）鉴定出20株临床分离的禽致病菌,其中15株大肠杆菌,另外5株分别为阴沟肠杆菌、肺炎克雷伯菌、鹑鸡肠球菌、铜绿假单胞菌及枸橼酸杆菌。其中鸡枸橼酸杆菌、七彩鸟肺炎克雷伯菌和鹑鸡肠球菌在兽医临床上未见报道。20株细菌均产BLA,产ESBLs菌有10株,检出率为50%（10/20）,8株为大肠杆菌,另外两株分别为肺炎克雷伯菌和鹑鸡肠球菌。临床分离菌的AmpC酶检测中鹑鸡肠球菌为阳性,其检出率为5%（1/20）。临床菌株中产ESBLs对25种抗生素的耐药率为25%～100%,非产ESBLs菌对25种抗生素的耐药率低于产ESBLs菌株,碳青酶烯类药物亚胺培南和美罗培南对两种菌株的敏感率均为100%;产ESBLs菌株对多种抗生素表现出多重耐药性和交叉耐药性;β-内酰胺类抗生素与β-内酰胺酶抑制剂或其它类抗生素联用均可明显提高产ESBLs菌对药物的抗菌活性。临床分离产AmpC酶的鹑鸡肠球菌除了阿莫西林和氨曲南外,对其余头孢菌素均敏感,其MIC值≤5μg/ml:同时对除了磷霉素、左氧氟沙星、加替沙星外的其余抗生素呈现多重耐药现象。10株产ESBLs酶菌株用TEM型、SHV型引物经PCR扩增均扩增出861 bp特异性目的片断;而CTX型引物经PCR扩增均扩增出905 bp特异性目的片断。其中8株大肠杆菌中有5株质粒上携带有TEM片段,一株有CTX片段,两株同时有TEM和CTX片段。临床分离肺炎克雷伯菌质粒上携带有TEM和SHV片段。鹑鸡肠球菌质粒上携带TEM片段。PCR产物经克隆后测序,对序列结果分析表明,各种TEM型临床分离产酶菌的序列同源性为99.2%～100%,产AmpC酶鹑鸡肠球菌用EBC型引物经PCR扩增出466bp特异性目的片断。ESBLs的基因型为TEM-6V、TEM-7V、TEM-8V、TEM-9V、SHV-11、CTX-M-1V,AmpC酶的基因型为EBC型。