论文摘要
僵蚕（Bombyx Batryticatus）作为传统中药,应用已久,现代药理研究表明僵蚕有抗炎、抑菌、抗癌、抗血栓、抗惊厥等作用,但尚无关于僵蚕抗癌作用的实验研究报道。本文报道了僵蚕醇提物对肿瘤细胞Hela的毒效与作用机理研究结果:利用形态观察、MTT法检测了Hela细胞在不同浓度的醇提物作用下形态、活力变化,用DNA Ladder、RT-PCR、Western blotting等手段研究了,僵蚕对Hela细胞增殖相关基因Bax和Bcl-2的表达水平,旨在明确僵蚕对肿瘤细胞生长的抑制作用和作用机理。细胞形态学表明:浓度为3mg/ml～6mg/ml的僵蚕醇提物处理Hela细胞,僵蚕提取物处理24 h后Hela细胞形态变化不明显;同样浓度药物处理48h后,细胞开始皱缩,尤其是僵蚕提取物浓度为4mg/ml～6mg/ml时多数细胞已经皱缩。细胞活力检测数据表明:浓度为3mg/ml～11mg/ml的僵蚕醇提物处理Hela细胞,僵蚕提取物处理24 h时,对Hela细胞有生长促进作用;而同样浓度作用48h后Hela细胞生长明显被抑制,细胞活力下降,僵蚕提取物处理浓度为6mg/ml～11mg/ml时表现出对细胞生长的明显抑制作用,抑制率保持在50%以下,且抑制率随浓度的增加而增加;同样浓度作用72h时,药物对细胞的生长抑制作用表现非常显著;抑制率达50%以上,作用浓度为9mg/ml以上时,抑制率达70%。细胞凋亡实验数据表明:浓度为3mg/ml～7mg/ml的僵蚕醇提物处理Hela细胞,细胞的基因组DNA表现出不同程度的降解,在僵蚕提取物处理终浓度为7mg/ml时DNA降解尤为明显。说明药物作用主要导致Hela细胞的凋亡。僵蚕提取物对Hela细胞Bax和Bcl-2基因表达水平的影响分析结果显示,僵蚕提取物处理浓度为3mg/ml～6mg/ml、僵蚕提取物处理36h后,RT-PCR和Western blotting都可以检测到僵蚕提取物处理组中Bax和内参基因β-actin在RNA及蛋白水平都正常表达,而Bcl-2在mRNA和蛋白水平上均被完全抑制,表明一定浓度的僵蚕提取物能够特异性抑制癌细胞凋亡抑制子基因Bcl-2在Hela细胞中的表达,而不影响Bax和β-actin的表达,说明僵蚕提取物对癌细胞生长抑制作用的分子机制之一是抑制了Bcl-2在细胞中的表达。