转bFGF和H+-ATPase耐盐碱红花生物反应器的研究

论文摘要

植物生物反应器指以植物悬浮细胞培养或整株植物为工厂大量生产具有重要功能的蛋白如人或动物的疫苗、抗体、重要的氨基酸,它们具有重要药用价值,或可作为食品添加剂、工业原料的植物次生代谢产物。也指以转基因的整株植物为工厂大量生产各种高价值的生物制品。红花（Carthamus tinctorius L.）为菊科（Compositae）红花属植物。在古代民间,红花被广泛应用于染料、化妆品。随着红花产业的迅速发展,人们已经开始把目光从传统的生产种植红花投入到红花遗传转化中,利用植物基因工程技术,转入药用蛋白基因,研制新型植物生物反应器。本研究利用农杆菌介导法,将碱性成纤维细胞生长因子bFGF基因及碱蓬耐盐碱基因液泡膜H+-ATPase的B亚基分别转入红花中,获得耐盐碱的转新品种红花并提高红花的耐盐碱性,主要结果如下：1.以新疆塔城红花为材料,利用农杆菌介导法,首次分别用bFGF基因、液泡膜H+-ATPase的ScVHA-B基因对红花进行遗传转化。2.激素条件优化通过本次实验发现,NAA和6-BA,GA3和TDZ,6-BA和TDZ激素的不同配比浓度对红花子叶的愈伤组织,再生芽诱导率和表达量有直接影响,实验结果确定在含有蔗糖（3%）,6-BA（1mg·L-1）的种子萌发培养基的发芽率最高为89%；在含有NAA（1.0mg·L-1）,6-BA（1.0mg·L-1）不定芽分化率43%；在含有6-BA（2.Omg·L-1）, NAA（0.5mg·L-1）,生根粉（1000mg·L-1）,KN03（3800mg·L-1）的生根培养基上红花再生芽生根率达到了15%。3.红花对潮霉素耐受性,草铵磷的有一定的敏感性,实验表明,筛选一定时间后,红花潮霉素抗性的最优浓度为5mg·L-1,Basta浓度1.5mg·L-1。4.确定芽诱导分化、芽伸长生根培养抑菌抗生素的最适宜浓度,最终确定抑菌抗生素浓度在芽诱导分化培养基中采用200mg·L-1头孢和100mg·L-1羧苄,再生芽伸长生根培养基采用100mg·L-1头孢和200mg·L-1羧苄。5.对转基因红花进行PCR检测,检测结果表明目的基因已经转入到红花基因组中。Southern blot分析表明H+-ATPase的ScVHA-B基因已经成功整合到红花基因组中,并且转B亚基植株的外源基因整合方式为单拷贝和多拷贝。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 前言
• 1.1 植物生物反应器的研究进展
• 1.2 农杆菌介导遗传转化法的研究
• 1.3 红花的研究背景
• 1.4 碱性成纤维细胞生长因子bFGF概述
• +-ATPases基因简介'>1.5 碱蓬液泡膜H⁺-ATPases基因简介
• 1.6 研究目的和意义
• 第二章 材料与方法
• 2.1 材料与试剂
• 2.2 实验方法
• 第三章 结果与分析
• 3.1 红花组织培养
• 3.2 红花再生苗筛选压,抗生素浓度
• 3.3 农杆菌介导法转化红花
• 3.4 转基因红花的分子生物学检测
• 第四章 讨论
• 4.1 激素对红花再生芽的影响
• 4.2 转H+-ATPases基因红花的抗逆性
• 4.3 影响红花转化率的因素
• 第五章 结论
• 参考文献
• 附录
• 作者简历