油桐桐酸合成酶基因（fadx）的克隆、反义表达载体的构建及对烟草的初步转化

论文摘要

随着全球性化石资源日益枯竭，加快发展以生物柴油为代表的可再生能源势在必行。以油桐的种子榨出的桐油作为原料生产生物柴油具有明显的优势，但美中不足是其主要成分α—桐酸(18：3Δ9cis，11trans，13trans含量过高，这不符合优质生物柴油原料多不饱和脂肪酸含量尽量低的要求。α—桐酸合成酶是控制亚油酸向α—桐酸转化的关键酶，本研究通过反义表达来抑制α—桐酸的合成，从而获得符合生产优质生物柴油标准的脂肪酸原料。方法是以生长中的油桐种子为材料，利用改良TRIzoL法提取总RNA，并根据GenBank中已经登录的α—桐酸合成酶基因fadx的序列，设计特异性引物，采用RT-PCR方法，得到fadx基因全长cDNA，克隆到pMD18-T-simple载体中测序并进行了生物信息学分析。将所得基因经BamHI和SacI酶切后插入表达载体质粒pBI121，构建反义表达载体pBI121 fadx，利用农杆菌介导法转入烟草叶片。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 1 引言
• 1.1 生物柴油综述
• 1.1.1 世界能源安全面临挑战
• 1.1.2 环境保护迫在眉睫
• 1.1.3 开发生物柴油的必要性
• 1.1.4 生物柴油的发展历史
• 1.1.5 生物柴油发展现状
• 1.1.6 生物柴油产业发展的瓶颈
• 1.1.7 油桐概述
• 1.2 脂肪酸脱氢酶概述
• 1.2.1 脂肪酸脱氢酶的分类
• 1.2.2 脂肪酸脱氢酶的结构特点
• 1.2.3 主要的脂肪酸脱氢酶基因
• 1.2.4 脂肪酸脱氢酶的应用前景
• 1.3 本研究的目的和意义
• 2 材料与方法
• 2.1 材料
• 2.1.1 植物材料
• 2.1.2 试剂盒
• 2.1.3 化学试剂
• 2.1.4 菌种
• 2.1.5 质粒载体
• 2.1.6 酶
• 2.1.7 部分仪器
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 部分溶液及培养基的配制
• 2.2.2 油桐种子桐酸合成酶基因的克隆与鉴定
• 2.2.3 pBI121fadx反义表达载体的构建及遗传转化
• 3 结果与分析
• 3.1 油桐种子中RNA的提取
• 3.2 fadx基因的扩增结果
• 3.3 pMD18-T-fadx重组质粒的鉴定
• 3.4 测序及序列分析
• 3.5 反义表达载体的构建
• 3.6 表达载体转化农杆菌的鉴定
• 4 讨论
• 5 结论
• 致谢
• 参考文献
• 作者简介