氨甲酰妥布霉素高产菌株的诱变选育

论文题目: 氨甲酰妥布霉素高产菌株的诱变选育

论文类型: 硕士论文

论文专业: 微生物与生化药学

作者: 杨文锋

导师: 夏焕章

关键词: 氨甲酰妥布霉素,黑暗链霉菌,诱变,发酵

文献来源: 沈阳药科大学

发表年度: 2005

论文摘要: 本文以基因破坏技术获得的阻断安普霉素合成的黑暗链霉菌ToZ-1为出发菌株，通过UV和NTG等诱变剂和诱变条件的考察，确定最佳选育手段，从而筛选到效价高、组分好的优良生产菌株ToZ-1-2。此菌株摇瓶发酵效价比出发菌株提高30％，薄层层析分离组分，产物中主组分为氨甲酰妥布霉素，有少量氨甲酰卡那霉素B，不产生安普霉素。 以此突变株为对象，通过对其遗传稳定性、发酵工艺、培养条件、补料过程的优化考察，结果表明：成熟的斜面孢子在冰箱中存放和斜面传代过程中，效价和组分未有变化，稳定性良好。发酵条件以18小时的种龄、10％的转种量、消泡剂为1.5％豆油、装量40ml的250 ml摇瓶、37℃培养120小时为佳。补料工艺以36小时同时补加葡萄糖和谷氨酰胺为好，而中期补加全料的方式，更有利于发酵产物的积累，发酵总亿提高30％。发酵后期，降低溶氧量，可减缓二次生长速率，延长产物的分泌期，提高发酵产量。 对发酵液的提取与精制，做了初步的尝试，确立组分的提取精制过程中，以强酸性苯乙烯阳离子交换树脂732进行吸附，以强碱性苯乙烯阴离子交换树脂711进行脱色，3％氨水解吸，收集250ml～700ml区间段的解吸液。乙醇结晶样品时，以5倍于结晶液的体积比进行结晶为最好。

论文目录:

目录

中文摘要

英文摘要

前言

1 妥布霉素概述

2 生物合成途径

3 菌种选育研究发展

4 发酵工艺研究

5 妥布霉素分析方法进展

6 氨基糖苷类抗生素生物合成的调节

7 提取和精制

8 论文工作目的

实验材料与方法

1 实验材料

1.1 菌株

1.2 培养基

1.3 试剂

1.4 仪器与设备

2 实验方法

2.1 菌种保藏方法

2.2 菌种选育

2.2.1 单孢子悬液的制备

2.2.2 出发菌株自然分离

2.2.3 NTG处理单孢子悬液

2.2.4 紫外线处理单孢子悬液

2.2.5 固体发酵琼脂块效价测定方法

2.2.6 发酵液效价测定方法

2.2.7 诱变参数的计算方法

2.3 筛选流程

2.4 发酵单位的测定

2.4.1 单剂量法

2.4.2 二剂量法

2.5 发酵组分的测定

2.6 发酵参数的测定

2.6.1 pH值

2.6.2 菌浓的测定方法

2.6.3 糖的测量方法

2.6.4 氨基氮的测定方法

2.7 发酵液的提取与精制流程

实验结果

1 出发菌株的确定

2 菌种选育

2.1 出发菌株生产能力考察

2.2 各种诱变手段及诱变条件的考察

2.2.1 紫外线诱变育种

2.2.2 NTG诱变育种

2.3 突变株选育谱系

2.4 突变株发酵产物组分图谱

2.5 突变株的稳定性考察

2.5.1 斜面冰箱保藏的稳定性考察

2.5.2 传代的稳定性考察

3 发酵工艺优化

3.1 发酵代谢曲线的测定

3.2 发酵参数的优化

3.2.1 转种时间的考察

3.2.2 转种量的考察

3.2.3 溶氧对发酵效价的影响

3.2.4 不同时期溶氧量的变化对发酵效价的影响

3.2.5 发酵温度的考察

3.2.6 消泡剂的考察

3.3 基础发酵培养基的考察

3.4 补料工艺的考察

3.4.1 补加葡萄糖的考察

3.4.2 补加谷氨酰胺的考察

3.4.3 补加葡萄糖和谷氨酰胺的考察

3.4.4 补加全料的考察

4 发酵液的提取与精制

4.1 解吸液的组分考察

4.2 阳离子交换树脂交换容量的考察

4.3 解吸液峰值的考察

4.4 不同倍量体积比对产物结晶的影响

讨论

结论

参考文献

致谢

发表文章目录

发布时间: 2006-11-27

参考文献

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