猪瘟RT-PCR诊断及抗体监测研究

论文题目: 猪瘟RT-PCR诊断及抗体监测研究

论文类型: 硕士论文

论文专业: 预防兽医学

作者: 沈中华

导师: 胡永浩,张以芳,王开荣

关键词: 猪瘟,诊断,抗体监测

文献来源: 甘肃农业大学

发表年度: 2005

论文摘要: 猪瘟(Hog Cholera,HC;或Swine Fever,SF)是由猪瘟病毒(Hog Cholera Virus.HCV;或Classical Swine Fever Virus,CSFV)引起的一种高度接触传染性传染病。本病遍布于全世界,流行广泛、死亡率高,对养猪业危害极大,许多国家制定兽医法规,都将猪瘟列为法定传染病之一,即必须列表上报的疫病。设在法国巴黎的国际兽医局(OIE)制定的《国际动物卫生法典》中,猪瘟被列为A类16种法定传染病之一,要求各会员国有义务报告疫情,按规定检疫和遵守国际交换的有关规定。在我国的《家畜家禽防疫条例实施细则》中猪瘟也被列为一类传染病。近些年来,随着养猪业尤其是规模化养猪业的迅速发展,猪瘟的流行和发病特点发生了很大的变化,其流行形式已从频繁发生的大流行转变为小规模、周期性、波浪式的地区性和散发性流行,发病特点以非典型猪瘟为主。猪瘟表现的多样性给本病的诊断带来了较大困难,易导致误诊,实验室常用的病毒分离和免疫学诊断等技术措施,已不能满足新形势的需要。因此,开展研究,在我省建立一种更先进的更为有效的诊断技术,以及进行推广应用,对预防和控制猪瘟具有重要实践意义。本文参照已发表的猪瘟病毒E2基因序列,设计合成了一对扩增片段大小为443bp的特异性引物,用RT-PCR方法对猪瘟标准强毒株、猪瘟兔化弱毒株、9份疑似猪瘟料以及对照组的牛病毒性腹泻病毒(BVBV)、口蹄疫病毒(FMDV疫苗)进行检测诊断,结果这对引物对猪瘟标准强毒株、兔化弱毒株和其中4份疑似病料均特异性地扩增出了与预期大小相符的443bp的RT-PCR产物,而对照的其他猪病病原的扩增结果为阴性。猪瘟疑似病料经兔体交互免疫试验,结果RT-PCR阳性的4份疑似病料均被判为含有猪瘟病毒,其余病料试验结果为阴性。表明RT-PCR对猪瘟的诊断是一种特异敏感的方法,在我省首次建立了猪瘟RT-PCR的诊断方法。疫苗接种是我国目前防制猪瘟的主要手段,其实质是让猪体内产生一定量的猪瘟抗体,以抵抗猪瘟病毒的侵袭,从而达到防制猪瘟的目的。因而,猪瘟抗体的监测,对如何免疫使猪适时产生猪瘟抗体具有极为重要的作用。本文用正向间接血凝试验(IHA),对云南楚雄猪场健康母所产的105头仔猪,分为猪瘟乳前免疫和不作任何免疫两组,在不同日龄采血分离血清进行免疫抗体和母源抗体监测,以研究其抗体的消长规律,通过抗体监测掌握了猪瘟抗体的消长规律特点,为科学合理地制定猪瘟免疫程序、检查猪瘟免疫效果提供了可靠依据。

论文目录:

摘要

Abstract

文献综述

前言

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 毒株

1.1.2 诊断液

1.1.3 试剂

1.1.4 猪瘟兔化弱毒冻干苗

1.1.5 待检病料

1.1.6 试验动物

1.1.7 仪器设备

1.2 方法

1.2.1 引物的设计与合成

1.2.2 病毒RNA提取

1.2.3 琼脂糖凝胶电泳检查提取的RNA

1.2.4 RT-PCR反应

1.2.4.1 cDNA合成

1.2.4.2 PCR扩增

1.2.5 RT-PCR产物的检测

1.2.6 兔体交互免疫试验

1.2.7 抗体监测

1.2.7.1 免疫接种及血清采集

1.2.7.2 正向间接血凝试验

2 结果

2.1 对照和试验RT-PCR扩增

2.2 疑似猪瘟病料RT-PCR扩增

2.3 兔体交互免疫试验

2.4 乳前免疫仔猪抗体监测

2.5 仔猪母源抗体监测

3 讨论

3.1 猪瘟RT-PCR诊断方法的建立在猪瘟监测中的意

3.2 猪瘟RT-PCR

3.3 猪瘟RT-PCR诊断

3.3.1 猪瘟RT-PCR诊断方法的优点

3.3.2 猪瘟RT-PCR诊断方法的操作关键

3.3.3 猪瘟RT-PCR诊断方法的体系优化

3.4 猪瘟抗体监测

4 结论

致谢

参考文献

作者简介

导师简介

发布时间: 2008-08-11

参考文献

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