人参愈伤组织细胞系表达乙肝病毒表面抗原的研究

论文摘要

为了能够获得更加经济、高效、安全的乙肝疫苗,本实验室运用根瘤农杆菌转染的方法,将乙肝表面抗原(HBsAg)基因转入人参愈伤组织细胞,筛选出稳定生长的转化体细胞,命名为CS83 细胞系。本研究分别应用ELISA、Western blotting 和免疫组织化学的方法,对CS83 细胞表达的HBsAg 进行了鉴定和细胞内定位。小鼠的注射免疫和家兔的口服免疫实验都证明,该细胞系表达的HBsAg 在动物体内能有效地诱导免疫应答,产生特异性抗体。同时发现,人参愈伤组织细胞内可能存在着某些能起到免疫佐剂作用的物质。在优化CS83 细胞固体培养条件的同时,进行了细胞的液体化培养,建立起了分散程度较好的悬浮细胞系,为CS83 细胞的工业化生产奠定了基础。本研究为利用植物组织培养技术生产医用蛋白提供了技术平台,为其他药用植物的开发利用奠定了坚实的基础。

论文目录

• 第一章 绪论
• 1.1 乙型肝炎病毒的发现及危害
• 1.2 乙肝疫苗的研究与应用
• 1.3 转基因植物乙肝疫苗
• 1.4 人参愈伤组织细胞培养
• 1.5 本课题的设计
• 第二章 仪器和材料
• 2.1 疫苗
• 2.2 生化及化学试剂
• 2.3 分子量标准
• 2.4 培养基
• 2.5 试剂盒
• 2.6 实验动物
• 2.7 仪器设备
• 第三章 方法
• 3.1 CS83 细胞表达的 HBsAg 的粗提及性质研究
• 3.1.1 酶联免疫吸附剂测定法检测 HBsAg 蛋白的表达
• 3.1.2 Western blotting 法检测HBsAg 蛋白的表达
• 3.1.3 免疫组织化学实验
• 3.1.4 蛋白质含量测定
• 3.1.5 CS83 细胞中 HBsAg 的稳定性研究
• 3.2 CS83 细胞免疫效果的初步研究
• 3.2.1 CS83 细胞提取液注射免疫 BALB/c 小鼠
• 3.2.2 CS83 细胞口服免疫家兔
• 3.3 CS83 细胞的培养条件优化
• 3.3.1 CS83 细胞固体培养细胞生长及抗原积累曲线的测定
• 3.3.2 CS83 细胞固体培养条件的优化
• 3.3.3 CS83 细胞液体悬浮培养系的建立
• 第四章 结果
• 4.1 CS83 细胞表达的HBsAg 性质研究结果
• 4.1.1 ELISA 法检测HBsAg 蛋白表达的结果
• 4.1.2 Western blotting 法检测HBsAg 蛋白表达的结果
• 4.1.3 免疫组织化学实验结果
• 4.1.4 蛋白含量测定结果
• 4.1.5 CS83 细胞中HBsAg 的稳定性
• 4.2 CS83 细胞免疫实验结果
• 4.2.1 CS83 细胞提取液注射免疫 BALB/c 小鼠结果
• 4.2.2 CS83 细胞口服免疫家兔结果
• 4.3 CS83 细胞培养条件优化结果
• 4.3.1 CS83 细胞固体静置培养生长及抗原积累曲线
• 4.3.2 CS83 细胞的固体培养条件优化
• 4.3.3 CS83 悬浮细胞系的建立
• 第五章 讨论
• 结论
• 参考文献
• 中文摘要
• 英文摘要
• 致谢
• 导师及作者简介