论文摘要
抗菌药物在畜牧生产和兽医临床上的广泛使用,带来了巨大的经济效益,但是,由于抗菌药物的不合理应用,导致了抗菌药物残留,给社会和环境带来巨大的危害。其中,青霉素类、头孢菌素类、氨基苷类、四环素类、大环内酯类和磺胺类是兽医临床上经常使用的药物,其残留较严重,危害较大。在常用的检测方法中,微生物学筛选方法以其简便、快捷、经济,灵敏度高,不需要复杂的前处理过程,检测时间短,检测效率高,能够进行大批量的样品筛选等优点在食品安全检测等领域起着非常重要的作用。国内在抗菌药物残留微生物法检测领域,仅限于方法学的研究,尚无商品化的抗菌药物残留检测试剂盒可供我国抗菌药物残留监控检测使用,现有的微生物学方法不能满足抗菌药物残留的快速检测。进口微生物学试剂盒的价格昂贵,在进口途中运输条件还会影响其稳定性,因此,国内急需建立灵敏、简便、快速、高效、经济、稳定的微生物学筛选方法及试剂盒。本研究的目的在于建立和研制牛奶和尿液中主要抗菌药物残留微生物学筛选方法及试剂盒,加强对常用抗菌药物残留的监控,减少和避免动物性食品中抗菌药物残留的发生,确保我国动物性食品的安全,保障人民的身体健康,促进对外贸易的顺利开展。以嗜热脂肪芽孢杆菌为检定菌,通过菌浓度和培养基的筛选,建立了牛奶中青霉素类、头孢菌素类、氨基苷类、四环素类、大环内酯类和磺胺类等六类抗菌药物残留的快速筛选方法及其试剂盒。按照乳及乳制品微生物抑制剂试验的国际操作标准(ISO13969)进行了灵敏度、重现性、假阳性率、假阴性率、动物残留、方法对比与稳定性等试验。结果表明,该方法的检测限为青霉素类2～15μg/L,头孢菌素类10～60μg/L,氨基苷类50～1250μg/L,四环素类100～250μg/L,大环内酯类40～700μg/L,磺胺类50～100μg/L。该方法的批内、批间相对标准偏差均小于25.1%。本研究基于上述技术研制开发出了牛奶中主要抗菌药物残留的微生物学快速筛选试剂盒,其假阳性率为1.0%,假阴性率为0,灵敏度、精密度、假阳性率、假阴性率、重现性等技术指标部分优于Eclipse 50。试剂盒在2～8℃储藏下,其保质期在6个月以上。以嗜热脂肪芽孢杆菌为指示菌,建立了尿液中青霉素类、头孢菌素类、氨基苷类、四环素类、大环内酯类和磺胺类等六类抗菌药物残留的快速筛选方法及其试剂盒。该方法的检测限为青霉素类2～25μg/L,头孢菌素类30μg/L,氨基苷类50～2000μg/L,四环素类75～150μg/L,大环内酯类40～700μg/L,磺胺类75～150μg/L。方法的批内、批间相对标准偏差均小于25.9%。本研究基于上述技术研制开发出了尿液中主要抗菌药物残留的微生物学快速筛选试剂盒,其假阳性率为7.0%,假阴性率为0,灵敏度、精密度、假阳性率、假阴性率、重现性等技术指标优于LAST(Live Animal Swab Test)。试剂盒在2～8℃储藏下,其保质期在6个月以上。本研究建立了牛奶、尿液中主要抗菌药物残留的微生物学快速筛选方法,研制了牛奶、尿液中主要抗菌药物残留的微生物学快速筛选试剂盒,与国外同类试剂盒相比,其整体水平达到国际先进水平。两种试剂盒具有简便、快捷、经济,灵敏度高,性能稳定等诸多优点,可广泛应用于兽药管理部门、食品卫生检疫部门、进出口贸易等部门,能为全面监控抗菌药物多残留提供有力的技术支持,具有较大的应用价值和广阔的市场前景。