论文题目: 猪圆环病毒Ⅰ型、Ⅱ型全基因克隆及其基因交换重组的研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 预防兽医学
作者: 朱玲
导师: 郭万柱
关键词: 猪圆环病毒,重组病毒,核酸疫苗
文献来源: 四川农业大学
发表年度: 2005
论文摘要: 研究中参照猪圆环病毒（Porcine circovirus, PCV）的基因组特点,自行分离鉴定PCV1-YA1和PCV2-SC株两个四川分离株,分别克隆其全基因;采用酶切、连接技术实现了两个毒株间部分基因交换,即将PCV2的ORF1克隆到PCV1上,构建重组病毒疫苗株PCV1-2;将PCV1的ORF1克隆到PCV2上构建重组病毒疫苗株PCV2-1。并采用单酶切消化、外切酶部分降解等操作构建了PCV2部分基因组的真核表达质粒pEGFP-C1-PCV2-SC-A。研究目的在于以期望能筛选研究猪圆环病毒新型基因工程疫苗,同时也为开展PCV病毒功能基因组学研究奠定基础。 1.猪圆环病毒Ⅰ型YA1株的全基因克隆及生物信息学分析 试验中采用1对特异性引物（P1/P2）,1次性扩增获得了1759bp的猪圆环病毒Ⅰ型（PCV1-YA1株）全基因组,将其克隆于pMD18-T质粒,构建了重组质粒pMD18-T-PCV1-YA1并进行了核苷酸序列测定及氨基酸序列推导。PCV1-YA1株与Genbank中公布的其它7个PCV1毒株间的同源性高达98.8-99.9%。氨基酸序列推导显示,PCV1-YA1株ORF1编码312个氨基酸,在20-22aa（NPS）有一个糖基化位点;ORF2编码233个氨基酸,在102-104aa（NYS）存在一个糖基化位点。疏水性和跨膜区分析结果表明PCV1-YA1株的ORF1集中在3个部分出现9个潜在疏水性区域和2个跨膜区;ORF2则存在2个潜在疏水性区域和1个跨膜区。 2.猪PCV2-SC株的分离鉴定及其全基因克隆与生物信息学分析 ELISA检测及荧光抗体检测确诊猪圆环病毒临床病例,分离了猪圆环病毒野毒（PCV2-SC）株。本试验中采用1对特异性引物（P3/P4）,1次性扩增获得了1767bp的猪圆环病毒Ⅱ型PCV2-SC株全基因组,将其克隆于pMD18-T质粒,构建了重组质粒pMD18-T-PCV2-SC并进行了核苷酸序列测定及氨基酸序列推导。通过BLAST与GenBank中来自美洲、欧洲及中国的部分PCV2毒株进行同源性比较分析,结果PCV2-SC株与Genbank中公布的其它16个毒株间的同源性介于93.6-98.6%,而与PCV1-YA1株相比其同源性则仅为69.2%。并对其主要ORF与其它PCV2毒株进行了比较,结果PCV2-SC株的ORF1与16个毒株的ORF1之间同源性为94.7-99.4%;ORF2的同源性则为90.3-99.6%。利用测定的PCV2-SC株ORF1和ORF2核苷酸序列推导了其对应的氨基酸序列,其中ORF1
论文目录:
文献综述
试验研究
第一章 猪圆环病毒Ⅰ型YA1株的全基因克隆及生物信息学分析
1．材判
1．1 种毒和细胞
1．2 质粒和菌株
1．3 主要酶和其它试剂
1．4 仪器设备
2．方法
2．1 猪圆环病毒Ⅰ型YA1株全基因扩增
2．2 扩增产物的克隆及序列测定
2．3 猪圆坏病毒Ⅰ型YA1株全基因组的生物信息学分析
3．试验结果
3．1 PCR扩增
3．2 重组质粒的酶切鉴定
3．3 序列测定与分析
4．讨论
4．1 关于猪圆环病毒Ⅰ型YA1株全基因的克隆及序列测定
4．2 关于猪圆环病毒Ⅰ型YA1株全基因组的序列分析
4．3 关于PCV1-YA1株主要ORF编码氨基酸序列的推导分析
5．结论
第二章 猪PCV2-SC株的分离鉴定及其全基因克隆与生物信息学分析
1．材料
1．1 种毒和细胞
1．2 质粒和菌株
1．3 主要酶和其它试剂
1．4 阳性血清及诊断试剂
1．5 仪器设备
2．方法
2．1 猪圆环病毒Ⅱ型SC株的分离鉴定
2．2 猪圆环病毒Ⅱ型SC株全基因扩增
2．3 扩增产物的克隆及序列测定
2．4 猪圆环病毒Ⅱ型SC株全基因组的生物信息学分析
3．试验结果
3．1 猪圆坏病毒Ⅱ型SC株的分离鉴定
3．2 PCR扩增
3．3 重组质粒的酶切鉴定
3．4 序列测定与分析
3．5 PCV2-SC株ORF1和ORF2氨基酸序列分析
4．讨论
4．1 关于猪圆环病毒Ⅱ型SC株的分离鉴定
4．2 关于猪圆环病毒Ⅱ型SC株全基因的PCR扩增
4．3 关于核苷酸及其推导的氨基酸序列分析
5．结论
第三章 猪圆环病毒Ⅰ型和Ⅱ型基因重组病毒株的构建及其部分生物学特性研究
1．材料
1．1 种毒和细胞
1．2 质粒和菌株
1．3 主要酶和其它试剂
1．4 仪器设备
2．方法
2．1 重组质粒pMD18-T-PCV1-2和pMD18-T-PCV2-1的构建
2．2 重组病毒PCV1-2株和PCV2-1株的构建
2．3 重组病毒PCV1-2株和PCV2-1株的部分生物学特性研究
3．试验结果
3．1 重组质粒pMD18-T-PCV1-2和pMD18-T-PCV2-1的构建
3．2 重组病毒PCV1-2株和PCV2-1株的构建
3．3 重组病毒PCV1-2株和PCV2-1株的部分生物学特性研究
4．讨论
4．1 关于重组质粒pMD18-T-PCV1-2和pMD18-T-PCV2-1的构建
4．2 关于重组病毒PCV1-2株和PCV2-1株的构建
4．3 关于重组病毒PCV1-2株和PCV2-1株对仔猪的致病性
4．4 关于重组病毒PCV1-2株和PCV2-1株的免疫原性
5．结论
第四章 猪圆环病毒Ⅱ型部分基因组真核表达质粒的构建及其在IBRS细胞包中的表达
1．材料
1．1 质粒和菌株
1．2 主要酶和其它试剂
1．3 试验动物
1．4 阳性血清和诊断试剂
1．5 仪器设备
2．方法
2．1 真核表达质粒pEGFP-C_1-PCV2-SC的构建
2．2 真核表达质粒pEGFP-C_1-PCV2-SC-A的构建
2．3 荧光抗体检测PCV2-SC株部分基因组在真核表达质粒pEGFP-C_1中的表达
2．4 真核表达质粒pEGFP-C_1-PCV2-SC-A接种仔猪后抗体水平检测
3．试验结果
3．1 真核表达质粒pEGFP-C_1-PCV2-SC的构建
3．2 真核表达质粒pEGFP-C_1-PCV2-SC-A的构建
3．3 荧光抗体检测PCV2-SC株部分基因组在真核表达质粒pEGFP-C_1中的表达
3．4 真核表达质粒pEGFP-C_1-PCV2-SC-A接种仔猪后抗体水平检测
4．讨论
4．1 关于真核表达质粒pEGFP-C_1-PCV2-SC-A的构建
4．2 关于PCV2-SC株部分基因组在真核表达质粒pEGFP-C_1中的表达
4．3 关于真核表达质粒pEGFP-C_1-PCV2-SC-A接种仔猪后抗体水平检测
5．结论
参考文献
致谢
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附录
发布时间: 2005-10-27
参考文献
- [1].核定位信号肽介导猪圆环病毒2型Cap蛋白出核机制的研究[D]. 侯强.中国农业科学院2018
- [2].PCV2 Cap蛋白羧基端氨基酸残基的功能性研究[D]. 湛洋.湖南农业大学2017
- [3].猪圆环病毒2型灭活疫苗（YZ株）的研制及免疫效力评价[D]. 潘杰.扬州大学2018
- [4].生物反应器悬浮培养PK-15细胞生产猪圆环病毒2型灭活疫苗及其质量评价研究[D]. 刘俊斌.扬州大学2018
- [5].规模化自繁自育猪场猪圆环病毒2型血清学调查及对母猪、生长育肥猪生产性能的影响[D]. 李瑞香.甘肃农业大学2016
- [6].猪圆环病毒2型的分子流行病学研究[D]. 温立斌.中国农业大学2005
- [7].猪圆环病毒2型感染对猪免疫功能影响的细胞与分子机制[D]. 司兴奎.中国农业大学2005
- [8].猪圆环病毒2型地方株的分离鉴定和诊断方法的建立及应用[D]. 曲连东.南京农业大学2006
- [9].猪圆环病毒2型致病机理和重组腺病毒介导shRNA抑制PCV2在体内外复制的研究[D]. 冯志新.南京农业大学2007
- [10].断奶仔猪多系统衰竭综合征的研究[D]. 杨增岐.西北农林科技大学2007
相关论文
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