利用改良滴冻法超低温保存部分柿属种质的研究

论文摘要

柿属植物种质资源丰富，但传统的田间种植保存，需要消耗大量人力、物力和财力，且易受病虫害、自然灾害等困扰。因此，建立与其配套的离体保存技术体系显得更为重要。超低温保存是目前植物种质资源长期稳定保存的理想方法之一，本试验对部分柿属植物进行了改良滴冻法超低温保存研究。主要研究结果如下：（1）比较了TDZ、ZT、CPPU三种细胞分裂素诱导芽分化的效果，发现TDZ的效果最好，大大缩短培养周期，利用TDZ对君迁子（Diospyros lotus L．Date plum）、磨盘柿（D．kaki Thunb．‘Mopanshi’）、鄂柿1号（D．kaki Thunb．‘Eshi 1’）、禅寺丸（D．kaki Thunb．‘Zenjimaru’）、前川次郎（D．kaki Thunb．‘Maegawa-jirou’）5种柿基因型的休眠芽诱导，2周后分化率可达到60.00％。（2）对美洲柿（D．virginiana L．common persimmon）、鄂柿1号（D．kaki Thunb．）、阳丰（D．kaki Thunb．‘Youhou’）三种不同基因型柿试管苗茎尖进行超低温保存方法的比较，结果发现玻璃化法、滴冻法、改良滴冻法的茎尖成活率分别为33.33％、37.78％、57.78％。（3）建立了部分柿属植物君迁子（D．lotus L．）、美洲柿（D．virginiana L．）和柿（D．kaki Thunb．）的6个基因型试管苗改良滴冻法保存体系：试管苗在白天25±1℃、晚上4±1℃，光照时间12h／d，弱光8001x的培养条件下进行6周的交替低温锻炼后，切取试管苗茎尖在含蔗糖0.5mol／L的培养基上预培养5d，20℃下装载液过渡10min，0℃下PVS2处理1.5h后液氮保存，40℃水浴快速化冻、洗涤后恢复培养，成活率超过60.00％。（4）分别对君迁子、磨盘柿、鄂柿1号、禅寺丸、前川次郎5种基因型柿休眠芽茎尖进行了改良滴冻法超低温保存研究：茎尖在含蔗糖0.5mol／L的培养基上预培养2d，然后在20℃下装载液过渡10min，0℃下PVS2处理1.5h后液氮保存，40℃水浴快速化冻、洗涤后恢复培养，再生率达到66.67％。

论文目录

• 缩略词表
• 摘要
• ABSTRACT
• 1. 前言
• 1.1 问题的提出
• 1.1.1 植物种质资源超低温保存
• 1.1.2 柿属植物种质资源保存现状及存在问题
• 1.2 前人研究进展
• 1.2.1 植物种质的超低温保存
• 1.2.1.1 超低温保存原理
• 1.2.1.2 影响超低温保存的因素
• 1.2.1.3 超低温保存方法
• 1.2.2 果树超低温保存
• 1.2.3 柿超低温保存
• 1.3 本研究的目的和内容
• 2. 材料与方法
• 2.1 试验材料
• 2.1.1 植物材料
• 2.1.2 仪器设备
• 2.1.3 主要试剂
• 2.2 方法
• 2.2.1 部分柿属植物离体培养体系的建立
• 2.2.1.1 休眠芽茎尖离体培养
• 2.2.1.2 不同类型细胞分裂素对部分柿属植物离体培养的影响
• 2.2.2 试管苗茎尖超低温保存研究
• 2.2.2.1 滴冻法体系
• 2.2.2.2 改良滴冻法体系
• 2.2.2.3 TTC活性检测
• 2.2.3 休眠芽茎尖超低温保存研究
• 2.2.4 数据分析方法
• 3. 结果与分析
• 3.1 部分柿属植物离体培养体系的建立
• 3.1.1 不同柿基因型的离体培养
• 3.1.2 不同类型细胞分裂素对部分柿属植物离体培养的影响
• 3.2 部分柿属植物茎尖改良滴冻法超低温保存体系的建立
• 3.2.1 试管苗茎尖改良滴冻法保存研究
• 3.2.1.1 低温锻炼对超低温保存的影响
• 3.2.1.2 预培养条件对超低温保存的影响
• 2处理时间对超低温保存的影响'>3.2.1.3 PVS₂处理时间对超低温保存的影响
• 3.2.1.4 化冻温度对超低温保存的影响
• 3.2.1.5 不同超低温保存方法对成活率的影响
• 3.2.2 休眠芽茎尖改良滴冻法保存研究
• 3.2.2.1 蔗糖预培养对柿休眠芽超低温保存的影响
• 2处理时间对柿休眠芽超低温保存的影响'>3.2.2.2 PVS₂处理时间对柿休眠芽超低温保存的影响
• 3.2.2.3 不同柿基因型休眠芽超低温保存情况
• 4. 讨论
• 4.1 部分柿属植物离体培养体系的建立
• 4.2 柿属植物改良滴冻法保存体系的建立
• 4.3 问题及展望
• 5. 参考文献
• 6. 图版和图版说明
• 致谢