论文摘要
人类自然流产的发病率高达31%,其中80%以上原因不明。众多证据表明,URSA与妊娠期免疫调节紊乱密切相关。URM作为一种难治性疾患,给临床治疗带来极大困难。目前国内外多应用配偶或第三者淋巴细胞免疫治疗;但临床疗效及机制不明确。调节性T细胞（主要是CD4+CD25+调节性T细胞）在母胎免疫耐受中起重要作用。转录因子Foxp3是CD4+CD25+调节性T细胞发育和功能维持的重要调节基因。Foxp3的异常表达直接影响调节性T细胞的功能;Foxp3表达降调节可导致调节性T细胞抑制功能下降。第一部分反复自然流产患者外周调节性T细胞亚群及其功能改变目的:评价不明原因复发性流产（unexplained recurrent miscarriage,URM）患者外周CD4+CD25+调节性T细胞Foxp3的表达,评价不明原因复发性流产患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞功能变化。方法:以正常生育非孕妇女（n=20）为对照,以URM（n=25）为研究对象,采用实时荧光定量PCR分析外周血单个核细胞（PBMC）Foxp3转录水平;以流式细胞术分析外周血CD4+CD25+T细胞Foxp3翻译水平。分离对照组妇女以及不明原因复发性流产患者外周血T细胞,用磁珠进行分离获得CD4+CD25+T细胞以及CD4+CD25-T细胞。体外对CD4+CD25+T细胞以及CD4+CD25-T细胞进行单独培养以及对CD4+CD25+T细胞和CD4+CD25-T细胞共培养,加入CCK-8试剂测CD4+CD25+T细胞增值能力。结果:流式细胞仪分析显示,URM组外周血CD4+CD25+Foxp3+/CD4+的比例显著低于正常对照组（P＜0.01）。实时荧光定量PCR结果显示,URM患者外周T细胞Foxp3转录水平明显低于正常对照组（P＜0.01）。磁珠分选的CD4+CD25+T细胞纯度为97.80%;CD4+CD25-T细胞纯度为97.60%。反复自然流产患者以及对照组妇女CD4+CD25+T细胞以及CD4+CD25-T细胞的增殖功能随着抗CD3浓度的增加而增强。URM组CD4+CD25+T细胞对CD4+CD25-T增值能力抑制作用显著低于对照组妇女（P＜0.05）。结论:反复自然流产患者外周调节性T细胞比例降调与URM的发病相关;不明原因复发性流产患者外周CD4+CD25+调节性T细胞免疫抑制功能明显下降。第二部分地屈孕酮诱导反复自然流产患者外周调节性T细胞扩增并改善妊娠结局目的:评价地屈孕酮对反复自然流产患者外周调节性T细胞及再次妊娠结局的影响。方法:20例不明原因复发性自然流产患者,于基础体温上升14天,每天口服每天口服地屈孕酮片20mg,连续服用20天。于妊娠第六周以及第九周分别检测外周血孕酮和β-HCG水平,在用药前及用药后第30天检测外周血CD4+Foxp3+T细胞比例:此后进一步随访妊娠结局。结果:在用药前外患者周CD4+Foxp3+T细胞的比例为3.4%±1.3%。在用药后第30天,达芙通组是4.8%±1.1%,与用药前比较,CD4+Foxp3+T细胞的比例明显升高（P＜0.05）。孕6周血清孕酮水平为29.87±7.01 ng/ml;β-HCG水平为36464.5±18592.0 mIU/ml。孕九周血清孕酮的水平为为22.97±8.79 ng/ml;β-HCG水平为106615.3±28880 8mIU/ml。妊娠成功率为80%。结论:地屈孕酮可扩增外周调节性T细胞,并改善不明原因反复自然流产患者的妊娠结局。