本文主要研究内容
作者邵玉乐,许曼,王辉,曾为俊,鲁国涛,赵丽丽,陈洪岩,刘建华,孟庆文（2019）在《利用CRISPR/Cas9技术敲除TLR3基因及其影响NDV复制的研究》一文中研究指出：TLR3是Toll样受体家族成员之一,在天然免疫与适应性免疫应答中均发挥重要作用。为探究TLR3在NDV感染中的作用机制,本研究针对犬TLR3基因设计了2个sgRNA,构建重组质粒,转染MDCK细胞,经PCR、测序、Western-blot检测敲除情况,CCK-8方法检测细胞增殖速度;新城疫病毒La Sota毒株感染细胞,荧光定量PCR分析病毒增殖水平和TLR3、TLR7、MDA5、IFN-β和IFIT1的m RNA水平。结果,筛选出1株TLR3基因缺失7 bp的MDCK细胞。Western-blot结果显示,TLR3蛋白不表达,其增殖速度与野生型MDCK细胞无显著差异。新城疫病毒La Sota毒株感染MDCK-WT细胞后,TLR3的m RNA含量在四个时间点均显著上调(P<0.01),表明新城疫病毒La Sota毒株可激活TLR3。再以新城疫病毒La Sota毒株感染MDCK-TLR3-/-细胞,IFN-β和IFIT1的m RNA含量在感染后第12小时和第24小时显著降低(P<0.01),病毒拷贝数在感染后第6、12和24小时显著高于WT组(P<0.01),表明TLR3在NDV介导的IFN-β反应和IFIT1的表达中具有重要作用,能够抑制NDV的复制。TLR7和MDA5的m RNA含量在感染后第6小时和第12小时显著上调(P<0.01),IFN-β和IFIT1的m RNA含量在感染后第48小时表达显著上调(P<0.01),NDV的拷贝数在第48小时在两组间显著性差异消失,提示TLR3缺失后TLR7和MDA5对其具有代偿作用。上述研究结果对NDV介导的天然免疫应答及疾病防控等研究具有重要意义。
Abstract
TLR3shi Tollyang shou ti jia zu cheng yuan zhi yi ,zai tian ran mian yi yu kuo ying xing mian yi ying da zhong jun fa hui chong yao zuo yong 。wei tan jiu TLR3zai NDVgan ran zhong de zuo yong ji zhi ,ben yan jiu zhen dui quan TLR3ji yin she ji le 2ge sgRNA,gou jian chong zu zhi li ,zhuai ran MDCKxi bao ,jing PCR、ce xu 、Western-blotjian ce qiao chu qing kuang ,CCK-8fang fa jian ce xi bao zeng shi su du ;xin cheng yi bing du La Sotadu zhu gan ran xi bao ,ying guang ding liang PCRfen xi bing du zeng shi shui ping he TLR3、TLR7、MDA5、IFN-βhe IFIT1de m RNAshui ping 。jie guo ,shai shua chu 1zhu TLR3ji yin que shi 7 bpde MDCKxi bao 。Western-blotjie guo xian shi ,TLR3dan bai bu biao da ,ji zeng shi su du yu ye sheng xing MDCKxi bao mo xian zhe cha yi 。xin cheng yi bing du La Sotadu zhu gan ran MDCK-WTxi bao hou ,TLR3de m RNAhan liang zai si ge shi jian dian jun xian zhe shang diao (P<0.01),biao ming xin cheng yi bing du La Sotadu zhu ke ji huo TLR3。zai yi xin cheng yi bing du La Sotadu zhu gan ran MDCK-TLR3-/-xi bao ,IFN-βhe IFIT1de m RNAhan liang zai gan ran hou di 12xiao shi he di 24xiao shi xian zhe jiang di (P<0.01),bing du kao bei shu zai gan ran hou di 6、12he 24xiao shi xian zhe gao yu WTzu (P<0.01),biao ming TLR3zai NDVjie dao de IFN-βfan ying he IFIT1de biao da zhong ju you chong yao zuo yong ,neng gou yi zhi NDVde fu zhi 。TLR7he MDA5de m RNAhan liang zai gan ran hou di 6xiao shi he di 12xiao shi xian zhe shang diao (P<0.01),IFN-βhe IFIT1de m RNAhan liang zai gan ran hou di 48xiao shi biao da xian zhe shang diao (P<0.01),NDVde kao bei shu zai di 48xiao shi zai liang zu jian xian zhe xing cha yi xiao shi ,di shi TLR3que shi hou TLR7he MDA5dui ji ju you dai chang zuo yong 。shang shu yan jiu jie guo dui NDVjie dao de tian ran mian yi ying da ji ji bing fang kong deng yan jiu ju you chong yao yi yi 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自中国兽医科学的邵玉乐,许曼,王辉,曾为俊,鲁国涛,赵丽丽,陈洪岩,刘建华,孟庆文，发表于刊物中国兽医科学2019年09期论文，是一篇关于新城疫病毒论文,中国兽医科学2019年09期论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自中国兽医科学2019年09期论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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