论文摘要
目的酒精性肝病（Alcoholic Liver Disease，ALD）的发病与多种因素有关。目前研究较多的有：遗传因素；免疫学因素；氧化应激等。其中细胞因子在酒精性肝病发病机制中的作用越来越受到重视。肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）是重要的细胞因子，在ALD的发病和发展过程中起到重要的作用。纤溶酶原激活物抑制剂-1（plasminogen activator inhibitor type 1，PAI-1）在化学性肝纤维化中的表达已有报导，但在ALD中尚缺乏相关研究。本实验通过建立酒精性肝病大鼠模型，观察不同时期大鼠肝脏的病理、肝纤维化程度与TNF-α、PAI-1定位和动态变化，进一步揭示ALD的发病机理，同时也观察抗纤复方Ⅰ号（Kang Xian Fu FangⅠ，KXⅠ）对其表达的影响，为进一步探讨酒精性肝病的作用机制、预防和临床治疗提供帮助。实验方法1．酒精性肝病动物模型的制备雄性Wistar大鼠，体重160-190克，随机分为三组，每组21只：正常组，正常饮食，给予生理盐水2.0ml／只，日三次灌胃，共12w。酒精组，给予乙醇日三次灌胃，共12w。其中0-4w，400ml／L乙醇8 g／k g／d；5-8w，500m l／L乙醇9 g／k g／d；9-12w，500m l／L乙醇10 g／k g／d。KXⅠ组，在给予同酒精组等量乙醇的基础上，给予KXⅠ水煎剂4.0ml／k g／d，日二次灌胃，共12w。2．肝脏组织病理学检测实验4w、8w、12w末分批处死动物。固定的肝组织经梯度酒精脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，连续切片5μm行HE染色，光镜下观察肝脏组织病理学的改变。3．TNF-α、PAI-1免役组织化学染色采用SABC法。TNF-α、PAI-1抗体均为1：100稀释。结果测定采用病理图象分析仪测定阳性面积积分光密度值。4．统计学方法统计学分析采用SPSS11.5软件，比较采用配对t检验。实验结果1．肝脏组织病理学改变：光镜下观察：酒精组4周末出现肝细胞胞质疏松，肝细胞肿胀呈气球样变，伴有肝细胞坏死及炎性细胞浸润；12周末出现脂肪变加重，肝细胞坏死增多，炎细胞浸润明显；KXⅠ组8周末时出现轻度脂肪变，肝细胞坏死及炎性细胞浸润均不明显。2．肝组织TNF-α、PAI-1免疫组化染色结果：TNF-α、PAI-1的阳性表达主要位于肝脏中央静脉周围细胞的胞浆中。正常组TNF-α、PAI-1基本不表达，随着造模时间的延长，酒精组TNF-α、PAI-1的表达呈进行性的增加；KXⅠ组随着给药时间的延长，TNF-α、PAI-1的表达同酒精组相比有所减弱，与酒精组比较有显著性的差异。结论1．酒精性肝病过程中，TNF-α、PAI-1的阳性表达主要位于肝脏中央静脉周围细胞的胞浆中．随着造模时间的延长，TNF-α、PAI-1的阳性表达进行性增强。2．抗纤复方I号能抑制TNF-α、PAI-1的阳性表达，减少肝细胞凋亡、促进细胞外基质降解，延缓肝纤维化的形成和发展。