Sox9和P450arom基因在早期雌、雄鸡胚性腺中的表达

论文摘要

为了解Sox9和P450芳香化酶（P450arom）基因在鸡胚性腺发育中的表达,确定它们是否可作为鉴定早期性腺发育及鉴定性腺性反转的细胞标记,本研究运用半定量RT-PCR和整体原位杂交技术（WISH）系统研究Sox9和P450arom基因分别在E6.5～E12.5雌、雄鸡胚性腺中的表达情况。本研究所取得的结果如下：1.半定量RT-PCR方法分析Sox9和P450arom基因分别在E6.5～E12.5雌、雄鸡胚性腺中的时间表达谱,并对它们在同一时期不同性别中以及同一性别不同时期中的差异性进行了分析。Sox9基因在E6.5～E12.5雄性鸡胚性腺中呈现特异性表达,即在E6.5～E12.5雌性鸡胚性腺中不表达。P450arom基因在E6.5～E12.5雌性鸡胚性腺中表达,在E6.5～E10.5雄性鸡胚性腺中不表达,而在E12.5雄性鸡胚性腺中开始表达。即P450arom基因在E6.5～E10.5雌性鸡胚性腺中呈现特异性表达。2.对Sox9基因在正常鸡胚和处理鸡胚（超表达Smarcel基因）性腺中分别进行空间表达模式分析,结果表明：在正常鸡胚性腺中Sox9基因主要在E6.5～E12.5雄性鸡胚性腺中表达,在雌性性腺中不表达。在处理鸡胚性腺中Sox9基因除在E6.5～E12.5雄性鸡胚性腺中表达外,还在E8.5～E12.5雌性鸡胚性腺中检测到表达。3.对P450arom基因在正常鸡胚和处理鸡胚（超表达Smarcel基因）性腺中分别进行空间表达模式分析,结果表明：在正常鸡胚性腺中P450arom基因主要在E6.5～E12.5雌性鸡胚性腺中表达,在雄性性腺中不表达。在处理鸡胚性腺中P450arom基因除在E6.5-E12.5雌性鸡胚性腺中表达外,还在E8.5～E12.5雄性鸡胚性腺中检测到表达。两种检测方法及对处理鸡胚（超表达Smarcel基因）进行整体原位杂交的验证结果都表明,Sox9和P450arom基因分别在所检测各时期的雌、雄性性腺鸡胚中都有表达；Sox9基因在E6.5～E12.5雄性鸡胚性腺中呈现特异性表达,可作为早期鸡胚性腺中雄性发育的细胞标记。P450arom基因在E6.5～E10.5雌性性腺中呈现特异性表达,也可作为早期鸡胚性腺中雌性发育的细胞标记。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 缩略词表
• 1 前言
• 1.1 研究问题的由来
• 1.2 文献综述
• 1.2.1 鸡胚性别鉴定及意义
• 1.2.2 鸟类性别决定研究进展
• 1.2.3 性腺处理及性反转
• 1.2.4 Sox9基因简介
• 1.2.5 P450arom基因简介
• 1.3 研究目的和意义
• 2 材料和方法
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 样品
• 2.1.1.1 鸡胚样品
• 2.1.1.2 引物设计
• 2.1.2 所用试剂和试剂盒
• 2.1.2.1 主要的试剂与试剂盒
• 2.1.2.2 主要试剂的配制
• 2.1.3 引物设计软件和鸡胚分析相关的软件
• 2.1.4 主要仪器设备
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 鸡胚性腺RNA提取及反转录、DNA的提取及性别鉴定
• 2.2.1.1 DNA的提取及性别鉴定
• 2.2.1.2 鸡胚性腺RNA的提取及反转录
• 2.2.2 时间表达谱分析
• 2.2.2.1 Sox9和P450arom基因引物的设计及扩增
• 2.2.2.2 Sox9和P450arom基因RT-PCR
• 2.2.3 空间表达谱分析
• 2.2.3.1 整体原位杂交中Sox9和P450arom探针的合成
• 2.2.3.2 整体原位杂交步骤
• 3 结果与分析
• 3.1 RNA提取以及鸡胚性别鉴定
• 3.1.1 鸡胚性别的鉴定
• 3.1.2 鸡胚性腺RNA提取
• 3.2 时间表达谱分析
• 3.2.1 Sox9基因在正常鸡胚中的半定量结果
• 3.2.2 P450arom基因在正常鸡胚中的半定量结果
• 3.3 空间表达模式分析
• 3.3.1 P450arom基因在正常鸡胚性腺中的表达
• 3.3.2 P450arom基因在处理（超表达Smarce1基因）鸡胚性腺中的表达
• 3.3.3 Sox9基因在正常鸡胚性腺中的表达
• 3.3.4 Sox9基因在处理（超表达Smarce1基因）鸡胚性腺中的表达
• 4 讨论
• 4.1 P450AROM可作为鉴定早期鸡胚性腺发育的细胞标记
• 4.2 Sox9可作为鉴定早期鸡胚性腺发育的细胞标记
• 4.3 SMARCE1基因
• 5 小结
• 5.1 本研究所取得的结果
• 5.2 本研究创新之处
• 5.3 下一步需要研究的问题
• 参考文献
• 致谢
• 在读期间发表的论文