论文摘要
1、三种猪O型口蹄疫抗体检测试剂盒的比较应用两种ELISA试剂盒（赛迪公司FMDV O型抗体检测阻断ELISA试剂盒，兰州所FMDV O型抗体检测液相阻断ELISA试剂盒）和一种正向间接血凝试剂盒（兰州所生产的FMDV O型正向间接血凝抗原试剂盒）对125份口蹄疫免疫猪血清进行了抗体水平测定，并对三种试剂盒测定结果的符合程度、及其各自的重复性进行了分析。试验结果表明三种试剂盒测得的抗体水平之间有较好的一致性，且三种试剂盒各自的检测结果重复性良好。这一工作为FMDV基因工程疫苗动物免疫试验的免疫学检测确定了一种可靠的方法。2、O型口蹄疫病毒代表性VP1基因的人工合成、表达及重组蛋白的免疫原性研究通过对GeneBank近十年内收录的O型口蹄疫病毒VP1基因序列的同源性比较分析，根据与我国口蹄疫防制工作有密切相关性的一个基因群的基因序列设计并合成了有群内抗原代表性的结构蛋白VP1全基因片段。将合成的序列克隆到原核表达载体pET-28a（+）中、构建了VP1的表达质粒pETVP1。SDS-PAGE和Western-blot分析表明该质粒的BL21（DE3）LysS转化菌在IPTG诱导下可特异性表达VP1蛋白，该重组蛋白以包涵体的形式存在、分子量约30KD，且能与口蹄疫病毒（FMDV）阳性血清发生特异性反应。动物接种实验表明重组蛋白能诱导小白鼠产生特异抗FMDV抗体。3、O型FMDV VP1基因与大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位（LTB）基因的融合表达及表达产物的免疫原性研究以质粒pMDTLT为模板、用PCR的方法扩增出LTB基因，然后将其插入到pETVP1质粒中VP1基因的上游、构建了含有融合基因LTBVP1的表达质粒pETLTBVP1，转化宿主菌BL21（DE3）LysS后进行诱导表达。表达产物经SDS-PAGE显示、重组蛋白以包涵体的形式表达、分子量约39KD；经Western-blot分析表明重组蛋白能与FMDV阳性血清及兔抗霍乱毒素（CT）血清反应，说明融合蛋白保持了LTB和VP1各自的免疫学活性。动物实验表明：该融合蛋白能诱导小鼠产生较强的免疫应答反应，其水平比试验中选用的普通商品口蹄疫苗所诱导的抗体水平还要高。4、LTB对VP1蛋白粘膜免疫效应增强作用的研究本实验将前面2个实验中的VP1、LTBVP1重组蛋白纯化后分别通过滴鼻、灌胃、灌肠等粘膜途径接种小鼠；最后采用正向接间血凝检测小鼠血清抗体水平，结果表明：单纯的VP1重组蛋白通过粘膜途径多次接种后能诱导出较弱的免疫反应，而LTBVP1融合蛋白二免后既能诱导小鼠产生较高水平FMDV特异性抗体。说明LTB可增强VP1蛋白通过粘膜途径所诱导的免疫反应。