湖南省牛无浆体病调查与分析

论文摘要

1.湖南省部分地区Bovine Anaplasmosis感染及传播途径调查运用颈静脉采血、鲜血涂片、染色镜检观察和动物接种试验等方法共调查了湖南长沙永安和龙华、益阳安化、娄底涟源和常德石门等地区五个中小型奶牛和肉牛场牛无浆体病发病情况,并通过对养殖场环境中吸血昆虫（厩蝇）鲜血涂片、阳性厩蝇内容物感染小鼠试验及兔子临床同层感染等研究了临床中无浆体病原的实际传播途径。结果表明,上述五个不同的养牛场均存在无浆体病感染,其阳性染虫率分别为37.5%、54.5%、57.14%、33.33%和63.64%;养殖场中不同年龄段牛舍内及其场址周围厩蝇的阳性感染率达71.6%。,厩蝇体内携带着无浆体病原;同时,阳性厩蝇内容物与患牛抗凝血接种免疫抑制小鼠,以及兔子临床同层感染均能使无浆体成功获得感染;此次调查的五个牛场中,无浆体病原的实际传播途径是厩蝇等非蜱类吸血昆虫的机械性传播。2.Bovine Anaplasma实验动物感染模型的建立运用地塞米松注射液长期抑制试验动物免疫力的方法,通过实验动物腹腔、皮下接种含有无浆体病原的患牛血液和阳性感染动物脏器悬液,阳性动物接触感染等试验,研究牛无浆体的感染和传播及在试验动物体内的消长规律,建立起无浆体人工感染模型。结果表明,以上感染方法均获成功。无浆体在小鼠和兔子体内呈现一定的规律性。无浆体在感染后第6 d和第8 d分别在小鼠和兔子血液中可以查到;感染后第16～19 d和第17～20 d在两者体内达到感染高峰;感染后第20 d和第25 d均逐渐消失。因此,可以用小鼠或兔子建立无浆体动物感染模型。无浆体的感染方式有以下几种:腹腔、皮下接种、接触感染。3.Bovine Anaplasma虫株分子生物学检测方法的初步研究运用原虫16S rRNA基因序列通用引物（Fd1和Rp2）对5个地区无浆体感染的阳性血液样品进行PCR扩增,经测序和序列拼接,获得5个无浆体样品16SrRNA基因的部分序列,运用分子生物学软件进行初步分析;并根据所获得序列的保守区间设计特异性引物,进行PCR诊断方法的探讨性研究。结果表明,在通用引物（Fd1和Rp2）下,5个地区无浆体感染的阳性血液样品均获得1425 bp大小的虫体16S rRNA基因条带;测序后5个无浆体16S rRNA基因的部分序列与GeneBank中Anaplasma marginale多个分离株的16S rRNA序列同源性均在97%～98%。5个分离虫株初步鉴定为牛边缘无浆体（Anaplasma marginale）;根据5个样品序列保守区间（51～738bp）设计的引物（Fp:5’-GGCCCGAGTTGGACCCTTGAC-3’,109bp～129bp;Rp:5’-CCTGGCGACCGTTGTTTCCTATTC-3’,634bp～611bp）能初步从5个地区无浆体感染的阳性血液样品中扩增出526 bp的目的条带,为进一步研究该病的PCR诊断方法奠定了基础。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 前言（绪论）
• 1 病原体
• 2 流行病学
• 3 致病及免疫
• 4 检测技术
• 5 立题依据及意义
• 参考文献
• 第一章 湖南省部分地区牛无浆体病感染及传播途径调查
• 1 材料与方法
• 2 结果与分析
• 3 讨论
• 4 小结
• 参考文献
• 第二章 牛无浆体实验动物感染模型的建立
• 1 材料与方法
• 2 结果与分析
• 3 小结与讨论
• 参考文献
• 第三章 牛无浆体虫株分子生物学检测方法的探讨
• 1 材料与方法
• 2 结果与分析
• 3 小结与讨论
• 参考文献
• 第四章 结论
• 符号说明
• 致谢
• 作者简历