论文摘要
目的观察FHL1（Four and a half LIM domains protein 1）基因在P19细胞向心肌细胞诱导分化过程中表达水平的变化;通过构建FHL1基因过表达（overexpression）载体,探讨FHL1基因过表达对P19细胞向心肌细胞分化的影响。方法（1）P19细胞经1%二甲基亚砜（DMSO）诱导悬浮培养4d形成细胞聚集体,将聚集体用生长培养基粘附培养至14d,观察细胞跳动情况,用肌钙蛋白I（cTnI）抗体行Western Blot以鉴定心肌细胞分化,采用RT-PCR、Western Blot技术在细胞分化成熟的不同时段检测P19细胞中FHL1基因mRNA和蛋白的表达水平;（2）构建FHL1基因的过表达载体,转染P19细胞后,以1%二甲基亚砜（DMSO）诱导分化,采用RT-PCR技术在细胞分化成熟的不同时段检测P19细胞中心肌分化标志基因MEF-2c、GATA-4的mRNA表达水平,Western Blot技术检测cTnI蛋白的表达变化。结果（1）DMSO诱导4d后,用生长培养基粘附培养至第8天,P19细胞出现自发性节律跳动的细胞团片,Western Blot检测cTnI蛋白呈阳性,FHL1基因在P19细胞向心肌细胞分化过程中,随细胞分化成熟该基因表达水平逐渐上调,Western Blot检测结果与RT-PCR检测结果基本一致。FHL1基因在分化第0～8天表达显著增高,各时间点之间差异显著（P＜0.05）,第8～14天表达趋于稳定,各时间点之间差异无显著性（P＞0.05）;（2）菌落PCR、重组载体酶切与测序、转染后P19细胞中his标签蛋白阳性均提示成功构建载体和转染P19细胞,同一时间点稳定过表达FHL1基因的P19细胞中GATA-4、MEF-2c基因mRNA表达水平、cTnI蛋白表达水平与空载细胞相比无明显差异（P＞0.05）。结论FHL1基因在P19细胞向心肌细胞分化过程中表达逐渐上调,但其基因过表达对P19细胞向心肌细胞的分化并无明显影响。
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