辣椒辐射诱变的分子鉴定与离体再生培养体系的构建

论文摘要

本试验用湖南醴陵特产的玻璃牛角椒作为材料,用不同剂量的60Co-γ辐射诱变处理辣椒愈伤组织,诱导再生出新植株,并对辐射处理后的辣椒进行细胞学观察以及分子遗传学分析,然后通过不同配的激素组合筛选出最佳配比,对愈伤组织进行离体培养的研究,构建出再生培养体系。从而为提高诱变育种的效率,提供数据参考。（1）通过对辐射剂量初步的筛选后,辐射处理设为3个梯度：20Gy,40Gy,60Gy。用60Co-γ对经过诱导出的愈伤组织在各剂量下分别进行辐射处理,统计出半致死剂量,并进行细胞学的观察统计。（2）通过对每个剂量下的辣椒的DNA进行RAPD分析,所选30个随机引物共扩增出清晰条带82条,平均每个引物扩增出4.8条带,其中含差异带12条,约为总条带数的14.6%。用统计学软件对数据进行分析,得出其各梯度的辣椒的遗传距离在0.934-0.988之间,以60Gy与20Gy之间的最远,20GGy与CK之间的最近。（3）在辣椒组织培养中,分别以子叶与茎作为外植体诱导愈伤组织,以MS基础培养基加3mg/L的6-BA和lmg/L的IAA诱导效果最好,诱导率达90%以上。愈伤组织分化不定芽以MS+6-BA（3mg/L）+IAA（0.5mg/L）+AgNO3（3mg/L）诱导效果最好,分化率达75%以上。不定根分化以MS+NAA（0.1mg/L）+IAA（0.5mg/L）效果最好,分化率达80%0。在对辐射处理后的愈伤组织进行离体再生培养中,提高含糖量1倍能够更好的维持细胞生长,提高存活率。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 文献综述
• 1.1 辣椒概况
• 1.1.1 生长习性
• 1.1.2 开发价值
• 1.2 辣椒育种主要研究进展
• 1.2.1 辐射诱变育种的研究进展
• 1.2.2 辣椒组织培养相关研究
• 1.2.3 组培与辐射诱变的结合育种
• 1.3 RAPD的研究进展
• 1.4 研究展望
• 1.4.1 抗病研究
• 1.4.2 育种技术的改进
• 1.5 研究的目的和意义
• 2 材料与方法
• 2.1 材料
• 2.2 方法
• 2.2.1 辣椒离体组织培养
• 2.2.1.1 无菌苗的获得
• 2.2.1.2 愈伤组织的诱导
• 2.2.1.3 愈伤组织的分化
• 2.2.2 辣椒愈伤组织的辐射处理
• 2.2.2.1 辐射处理方法
• 2.2.2.2 辐射后辣椒愈伤组织的分化诱导培养
• 2.2.2.3 辐射后的遗产学分析
• 2.2.2.4 辐射后离体再生体系的构建
• 2.2.2.5 再生苗的移栽
• 2.2.3 RAPD分析
• 2.2.3.1 总DNA的提取
• 2.2.3.2 PCR反应体系的条件摸索
• 2.2.3.3 引物的筛选
• 2.2.3.4 观察结果及谱带分析
• 3 结果与分析
• 3.1 不同激素配比对辣椒组织培养的影响
• 3.1.1 不同激素配比对辣椒愈伤组织诱导的影响
• 3.1.2 不同激素配比对辣椒外植体再生分化的影响
• 3.2 辐射诱变处理结果
• 3.2.1 不同辐射剂量对外植体再生分化的影响
• 3.2.2 不同辐射剂量下再生植株的细胞学观察
• 3.3 RAPD分析
• 3.3.1 总DNA的提取结果
• 3.3.2 PCR反应体系的条件摸索
• 3.3.3 引物的筛选
• 3.3.4 观察结果及谱带分析
• 4 讨论
• 4.1 辣椒离体培养体系的建立
• 4.2 辐射对愈伤组织生长的影响
• 4.3 辣椒DNA的提取
• 4.4 RAPD反应体系的优化
• 4.4.1 PCR条件的摸索
• 4.4.2 琼脂糖凝胶电泳
• 4.5 RAPD的结果分析
• 参考文献
• 致谢
• 作者简历