活血解毒中药干预动脉粥样硬化易损斑块的作用及机理研究

论文摘要

目前,动脉粥样硬化（AS）易损斑块在导致急性心血管事件方面的重要性已受广泛重视。改善易损斑块内部成分,使其趋于稳定,成为防治急性心血管事件的重要内容。随着“AS炎症反应”学说的公认,为中医产生新的冠心病病机学说、更新治疗观念提供了良好契机。我们在既往动物实验研究的基础上,提出“活血解毒——抑制炎症反应——稳定斑块”的假说,并从基础研究和临床试验两个方面展开研究。1.基础研究:活血解毒中药对ApoE基因敲除(ApoE-/-)小鼠斑块稳定性的影响及机制探讨。目的:观察活血（三七总皂苷）、解毒（黄连提取物）、活血解毒（虎杖提取物、大黄醇提物）中药有效部位对ApoE-/-小鼠主动脉粥样斑块稳定性的影响,并从抑制炎症反应、调节脂质代谢和改善胶原沉积及代谢三个角度探讨其作用机制。方法:70只ApoE-/-小鼠经“西方膳食”饲料喂养13周后,随机取4只小鼠观察基础AS病变水平。其余小鼠随机分为6组:虎杖提取物组、大黄醇提物组、黄连提取物组、三七总皂苷组、辛伐他汀组、模型组各11只,并以同品系C57BL/6J小鼠10只作为正常对照。继续高脂喂养并按体重比折算的临床推荐剂量给予相应药物治疗13周后,处死取主动脉根部的4个切面,分别行HE染色、Movat染色、苦味酸天狼星红染色以及免疫组织化学染色法观察斑块内部成分,同时取血清用酶联免疫吸附法（ELISA）检测炎性相关指标,实时荧光定量PCR法检测小鼠主动脉内相关基因表达,观察并计算:1)主动脉斑块形态变化:包括斑块面积,细胞外脂质、泡沫细胞、胶原成分各自占斑块面积的百分比以及斑块内脂质成分与胶原成分比值,埋藏纤维帽数目以及纤维帽占斑块表层比值,并结合免疫组化染色半定量观察斑块内平滑肌细胞的阳性面积,最后采用易损指数综合评价药物对小鼠主动脉斑块稳定性的影响;2)血脂改变及对脂质代谢相关基因周脂素和清道夫受体CD36的基因表达影响;3)炎性指标:血清超敏C反应蛋白（hs-CRP）和可溶性白细胞分化抗原配体（sCD40L）水平、斑块内粒细胞-巨噬细胞集落细胞刺激因子（GM-CSF）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）的表达、过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPAR-γ）和核转录因子-κB（NF-κB）的基因表达;4)胶原的合成代谢:Ⅰ、Ⅲ型胶原的组成、基质金属蛋白酶9（MMP-9）及组织金属蛋白酶抑制剂1（TIMP-1）的表达。结果:（1）无论是在改善斑块易损指数方面,还是在修复斑块纤维帽的能力方面,活血解毒中药虎杖提取物及大黄醇提物组,均优于单纯活血中药三七总皂苷和单纯解毒中药黄连提取物组。综合评价药物稳定斑块的作用,上述药物表现出的趋势是活血解毒中药＞清热解毒中药＞活血化瘀中药;（2）虎杖提取物和大黄醇提物还可明显降低ApoE-/-小鼠血清炎症标志物hsCRP及sCD40L水平,优于活血对照药三七总皂苷和解毒对照药黄连提取物,这与稳定斑块的作用相平行。各中药组对斑块内炎性因子GM-CSF表达均有一定抑制作用,大黄醇提物还可明显抑制TNF-α表达,而黄连提取物组则明显促进斑块内PPAR-γmRNA和蛋白表达;（3）各中药组可不同程度调节ApoE-/-小鼠血清脂蛋白水平,减少斑块内细胞外脂质成分,其中大黄醇提物、黄连提取物还可明显抑制斑块内perilipin mRNA表达,但各中药组清道夫受体CD36的基因表达无显著影响;（4）各中药组均可明显增加斑块内胶原纤维成分,降低Ⅲ/Ⅰ型胶原比值,其中虎杖提取物、三七总皂苷、黄连提取物组MMP-9/TIMP-1比值亦明显降低。结论:活血、解毒及活血解毒中药有效部位三七总皂苷、黄连提取物、虎杖提取物、大黄醇提物在临床推荐剂量上均可通过改善斑块内部成分发挥稳定易损斑块的作用,但其作用环节有所差异。其中,兼有活血和解毒作用的中药虎杖提取物、大黄醇提物效果最为显著。其机制可能与抑制炎症反应、调节脂质代谢和改善胶原沉积及代谢有关,尤以抑制炎症反应为最主要机制,验证了“活血解毒——抑制炎症反应——稳定斑块”的假说。2.临床研究:活血解毒中药对冠心病稳定期患者血清炎症标记物的影响。目的:以新清宁片（熟大黄）为活血解毒中药的代表药物、以丹七片为活血对照药,观察在常规他汀类药物治疗基础上加用新清宁或丹七片对冠心病稳定期患者血清炎症标志物的影响。方法:将30例冠心病稳定期患者随机分为三组:他汀对照组,予他汀类降脂药常规治疗;活血中药治疗组,在他汀类药物常规治疗基础上加用丹七片,每次三片（0.3g╱片）,每天3次;活血解毒中药治疗组,在他汀类药物常规治疗基础上加用新清宁片,每次三片（0.3g╱片）,每天3次。每组10例。治疗1个月后,观察患者治疗前后血清hs-CRP、TNF-α、MMP-9和CD40L浓度变化,血脂水平,心绞痛症状和血瘀证积分变化。结果:无论是降低冠心病患者血清hs-CRP浓度、调节血脂还是降低患者心绞痛症状和血瘀证积分方面,活血解毒中药治疗组（他汀药常规治疗加用新清宁片）均表现出良好作用,优于他汀药对照组及活血中药治疗组（他汀药常规治疗加丹七片）。但各组对血清TNF-α、MMP-9和CD40L水平影响无显著差异。结论:对于稳定期冠心病患者,他汀药常规治疗加用活血解毒中药在抗炎、调脂等方面优于加用活血中药,与实验研究结果一致,为“活血解毒——抑制炎症反应——稳定斑块”的假说提供了进一步支持。虽然在改善心绞痛症状和血瘀证积分方面,加用活血解毒药亦比加用活血中药作用明显,但本研究仅为小样本预试验,在急性心血管事件预防方面有无更大获益尚需大样本、长期随访的临床试验加以证实。

论文目录

• 缩略词表
• 中文摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 第一部分 基础研究
• 实验一 活血解毒中药有效部位对APOE基因敲除小鼠主动脉斑块稳定性的影响
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 实验二 活血解毒中药有效部位对APOE基因敲除小鼠主动脉粥样硬化斑块炎症反应的影响
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 实验三 活血解毒中药有效部位对APOE基因敲除小鼠主动脉粥样硬化脂质代谢的影响
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 实验四 活血解毒中药有效部位对APOE基因敲除小鼠主动脉粥样硬化斑块胶原沉积及代谢的影响
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 小结
• 第二部分 临床研究
• 活血解毒中药对稳定期冠心病患者血清炎症标记物的影响
• 资料与方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 小结
• 结语
• 第三部分 文献综述
• 综述一、易损斑块、炎症和急性冠脉综合征
• 综述二、中医药干预易损斑块的研究进展
• 综述三、"瘀毒致病"理论与急性冠脉综合征
• 致谢
• 个人简历