HChEGF在原核和真核中的高效表达及应用研究

论文摘要

表皮生长因子（EGF）是一个小分子多肽,具有多种生物学效应及临床应用价值。本研究依据hEGF 基因的序列,参照家蚕密码子的偏爱性,适当参照大肠杆菌的优选密码子设计并合成了与hEGF 基因序列不同的HChEGF,该序列能编码同hEGF 基因完全一致的氨基酸序列。将HChEGF 基因克隆进原核表达载体pET-28a（+）,在大肠杆菌中获得了与组氨酸融合的高效表达。HChEGF 是天然hEGF 基因表达水平的700 倍,产物占菌体总蛋白的30%以上,Western blot 显示在10kDa 附近有一条特异条带。通过金属鏊和亲和层析,获得了电泳纯的目的蛋白。将HChEGF 基因克隆进pBacPAK-His（1）,获得了杆状病毒转移载体pBacPAK—His（1）-HCEEGF,在脂质体的介导下,与线性化的家蚕杆状病毒Bm-BacPAK6 共转染家蚕培养细胞Bm-N,经空斑筛选,PCR 检测,获得了重组病毒Bm.BacPAK—HChEGF。SDS-PAGE 检测表明,在感染重组病毒后,家蚕幼虫、蛹的血淋巴中可以检测到一条分子量约为10kDa 的特异性条带。EIASA检测显示,随着时间的延长,表达量逐渐增加,120h 为33.07gg/mL 蛹血淋巴。家蚕表达的hEGF 对原代培养的大鼠乳鼠的肾细胞的生长有明显的促进作用;动物试验表明,检查口服蚕蛹表达hEGF 的SD 大鼠,其血液中有较高水平的hEGF,并且对酸诱导的急性胃粘膜损伤有明显的修复作用。

论文目录

• 前言
• 第一章 表皮生长因子（EGF）研究进展
• 1 分离与纯化
• 2 生理生化特性
• 3 EGF 家族与相关蛋白
• 4 EGF 的基因及前体分子
• 5 EGF 的受体及作用机制
• 6 EGF 的生物学效应及临床应用价值
• 7 EGF 的基因工程
• 第二章 昆虫杆状病毒表达载体系统
• 1 杆状病毒概论
• 2 杆状病毒表达系统的原理
• 3 杆状病毒表达系统的优缺点
• 4 杆状病毒表达系统的改进
• 5 杆状病毒表达系统的应用前景
• 第三章 材料与方法
• 1 一般材料
• 2 常用仪器
• 3 常用方法
• 第四章 HChEGF 基因的合成
• 1 材料和方法
• 2 结果和分析
• 第五章 HChEGF 原核表达载体的构建和表达
• 1 材料和方法
• 2 结果和分析
• 3 讨论
• 第六章 HChEGF 基因在家蚕杆状病毒表达系统中的表达
• 1 材料和方法
• 2 结果和分析
• 3 讨论
• 第七章 HChEGF 基因在家蚕中的表达产物的应用研究
• 1 材料和方法
• 2 结果和分析
• 3 讨论
• 结论
• 参考文献
• 攻读学位期间发表论文及申请专利
• 附录
• 致谢
• 苏州大学硕士学位论文详细摘要