瑶药千斤拔（Flemingia philippinensis Merr.et Rolfe）的化学成分及抗肿瘤活性研究

论文摘要

千斤拔为豆科（Leguminosae）千斤拔属（Flemingia）蔓性千斤拔（Flemingia philippinensis Merr.et Rolfe.）的干燥根。瑶医认为千斤拔可用于治疗风湿痹痛、跌打损伤、慢性肾炎、支气管炎以及妇女带下等症。本文对其进行了较为系统的化学成分和抗肿瘤活性研究。应用现代色谱技术和方法研究了千斤拔的石油醚部位、氯仿部位、乙酸乙酯部位的了化学成分。共分离得到了17个单体化合物和1个混合物。并通过现代波谱学方法技术（IR,EI-MS,1H-NMR,13C-NMR,DEPT,GC-MS）进行结构鉴定。17个单体化合物结构鉴定为：羽扇豆醇（1）,Eriosematin （2）,β-谷甾醇（3）,Flemichapparin C （6）,咖啡酸三十烷酯（7）,Flemiphilippinin A （8）,邻苯二甲酸二异丁酯（9）,大黄素甲醚（10）,染料木黄酮（11）,白桦脂酸（12）,Osajin（13）,3,5-二羟基肉桂酸二十八酯（14）,Lupinalbin A （15）,2’,4’,5,7-四羟基异黄酮（16）,蟛蜞菊内酯（17）,4′,7-二羟基异黄酮（18）红灰青素（19）。混合物鉴定为：β-谷甾醇（3）,豆甾醇（4）和菜油甾醇（5）。其中化合物5、7、9、14、17、18、19为千斤拔属中首次分离鉴定,化合物4为该种中首次分离得到。采用MTT法研究了化合物2、6、7、8、10、11、13、14、15的抗肿瘤活性。实验结果表明：5个黄酮类化合物（2、8、11、13、15）显示出明显的抗肿瘤活性,并存在着一定的量效关系,其他化合物抗肿瘤活性不明显。5个黄酮类化合物在抗肿瘤方面均显示出一定的选择性。Osajin和Flemiphilippinin A在抑制乳腺癌细胞MCF-7上表现出来很好的活性,IC50值分别达到了19.23±0.71μmol／L和15.93±1.93μmol／L。Lupinalbin A在抑制乳腺癌细胞MCF-7和肝癌细胞HepG2细胞株生长效果都很明显,IC50值分别达到了22.21±1.69μmol／L和27.06±3.66／μmol／L。染料木黄酮（Genistein）抑制宫颈癌Hela细胞生长效果表现突出,IC50值达到了22.41±5.62μmol／L。分别采用水蒸气蒸馏（SD）、超声萃取水蒸气蒸馏（UESD）、超临界CO2萃取（SFE-CO2）三种方法对千斤拔的挥发性成分进行提取,并对其化学成分及抗肿瘤活性进行比较。结果表明：不同提取方法所得到的挥发油在化学成分和生物活性方面存在差异。SD法、UESD法和CO2-SEF法提取的挥发油的收率分别为0.03%,0.08%和0.5%。SD法和UESD法提取的主要化学成分为萜烯类的物质,而CO2-SEF法提取的主要化学成分是醇和酸类物质。在质量浓度为150ug／mL时,SD法提取的挥发油对肿瘤细胞的抑制率达到了69.13%,UESD法为59.91%,而CO2-SEF法提取的挥发油对肿瘤细胞A549的抑制率仅有24.08%。通过综合比较分析,挥发油中的雪松烯和长（松）叶烯-（V4）可能是抑制肺癌细胞A549的主要活性成分,这一研究结果迄今未见报道。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 前言
• 1.1 千斤拔化学成分研究综述
• 1.1.1 黄酮类成分
• 1.1.2 甾体和萜类化学成分
• 1.1.3 蒽醌类化学成分
• 1.1.4 多糖类成分
• 1.1.5 挥发油成分
• 1.1.6 其他类成分
• 1.2 千斤拔的药理活性研究现状
• 1.2.1 抗炎镇痛研究
• 1.2.2 保护血脑屏障功能
• 1.2.3 保护神经的作用
• 1.2.4 类雌激素作用和抗雌激素活性
• 1.2.5 细胞毒活性
• 1.2.6 急性毒性实验
• 1.2.7 抗血栓作用研究
• 1.3 制剂及临床应用
• 1.4 本课题研究的目的和意义
• 第二章 千斤拔的化学成分研究
• 2.1 实验材料、试剂和仪器
• 2.1.1 实验材料
• 2.1.2 实验试剂
• 2.1.3 仪器
• 2.2 实验部分
• 2.2.1 石油醚萃取部位的化学成分分离
• 2.2.2 氯仿萃取部位的化学成分分离
• 2.2.3 乙酸乙酯萃取部位的化学成分分离
• 2.2.4 化合物的物理常数与光谱数据
• 2.3 结果与分析
• 2.4 结论
• 第三章 主要单体化合物的体外抗肿瘤活性研究
• 3.1 实验材料,试剂和仪器
• 3.1.1 细胞株
• 3.1.2 材料与试剂
• 3.1.3 仪器
• 3.1.4 主要试剂配制
• 3.2 实验部分
• 3.2.1 细胞培养
• 3.2.2 体外抗肿瘤活性测定（MTT法）
• 3.3 结果与分析
• 50值'>3.3.1 单体化合物抑制肿瘤细胞的IC₅₀值
• 3.3.2 对乳腺癌细胞MCF-7的抑制作用
• 3.3.3 对肝癌细胞HepG2的抑制作用
• 3.3.4 对宫颈癌细胞Hela的抑制作用
• 3.4 结论
• 第四章 千斤拔挥发性成分研究
• 4.1 实验部分
• 4.1.1 材料、试剂和仪器
• 4.1.2 千斤拔挥发油的提取
• 4.1.3 挥发油的化学成分分析
• 4.1.4 抗肿瘤活性的测定（MTT法）
• 4.2 结果与分析
• 4.2.1 不同方法提取挥发油的收率的比较
• 4.2.2 不同方法提取挥发油的化学成分的比较
• 4.2.3 不同方法提取的挥发油的抑制肺癌细胞A549活性的比较
• 4.3 结论
• 结束语
• 参考文献
• 附录Ⅰ 化合物的图谱
• 附录Ⅱ 在学期间发表论文情况
• 致谢