嗜水气单胞菌BYKAH2008AC株外膜蛋白和溶血素双基因的融合表达

论文摘要

嗜水气单胞菌的外毒素、胞外蛋白酶、S层蛋白和外膜蛋白是其重要的毒力因子。气溶素类外毒素HEC对同型和异型的嗜水气单胞菌的攻击均显示出极显著的保护作用。而溶血素作为嗜水气单胞菌气溶素类外毒素之一，广泛存在于嗜温气单胞菌中，其减毒基因工程亚单位疫苗实验室试验有很高的保护率。外膜蛋白基因是嗜水气单胞菌重要的粘附因子和保护性抗原，不但能激发机体的包括体液免疫在内的多种免疫机制，还可以与不同血清型该病原菌产生免疫交叉反应。本文在完成外膜蛋白基因原核表达及多克隆抗体制备的基础上，进一步尝试了对外膜蛋白基因和溶血素基因的融合表达。结果如下：（1）以嗜水气单胞菌BYKAH2008AC的基因组DNA为模板，PCR扩增得到嗜水气单胞菌的OmpTS基因和Hly基因的ORF区，各包含335个和461个氨基酸残基，编码37kD和52kD的蛋白。（2）同源性分析显示BYKAH2008AC的OmpTS基因编码的蛋白与嗜水气单胞菌外膜蛋白的同源性为95.9%，且与多株嗜水气单胞菌的粘附素同源性都高达97%以上，而BYKAH2008AC的Hly基因编码的蛋白除与J1，HA7，GA1，BA17等多株嗜水气单胞菌的溶血素同源性为99%以上外，其与气溶素的高度同源性也说明了二者存在共同抗原表位的可能。（3）通过构建重组表达质粒pET32a-OmpTS-Hly，采用大肠杆菌BL21对融合基因进行了诱导表达及蛋白纯化（4）以表达的融合蛋白为抗原免疫新西兰大白兔，兔抗OmpTS-Hly重组融合蛋白多克隆抗体经ELISA测定效价为1：40000。同时以His-tag多抗为对照，Western blot结果验证了该重组融合蛋白的抗原性，为探索其作为基因工程亚单位疫苗的候选成分的可能性提供了理论依据。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 引言
• 第一章 嗜水气单胞菌的致病性及免疫防治研究
• 1 流行性及组织病理变化
• 2 毒力因子作用机制
• 3 免疫防治研究
• 3.1 药物防治
• 3.2 疫苗的研制及开发
• 第二章 研究内容与技术路线
• 1 研究内容
• 2 技术路线
• 第三章 嗜水气单胞菌 BYKAH2008AC 的分离鉴定
• 1 材料
• 2 试验方法
• 3 结果与讨论
• 第四章 嗜水气单胞菌 BYKAH2008AC 株 OmpTS 基因的原核表达及多抗制备
• 1 材料
• 2 试验方法
• 3 结果与讨论
• 第五章 嗜水气单胞菌 BYKAH2008AC 株 OmpTS 与 Hly 双基因表达载体构建
• 1 材料
• 2 试验方法
• 3 结果与讨论
• 第六章 BL21/pET32a-OmpTS-Hly 诱导表达、蛋白纯化及多抗制备
• 1 材料
• 2 试验方法
• 3 结果与讨论
• 第七章 总结
• 参考文献
• 在学研究成果
• 致谢
• 论文摘要
• Abstract